朱秀安

北京大学第三医院  北京大学眼科中心100083

目的：应用体外无支架组织培养方法研究人角膜基质干细胞的体外分化能力及重组角膜基质样组织的能力。

方法：应用流式细胞体外分离并克隆人角膜基质干细胞， 应用没有任何支架的自由漂浮的细胞团培养体外克隆的干细胞3周.应用基因分析，PCR，免疫荧光染色和免疫蛋白检测培养的细胞团的基因表达.电镜检测角膜胶原纤维的大小和排列。

结果： 人角膜基质干细胞形成的细胞团在无血清培养条件下，能表达角膜基质细胞特有的基因并分泌角膜基质特有的细胞外基质成分：keratocan， keratan sulfate， I型V型和VI型胶原纤维. 细胞团中富含connexin43 和cadherin11，与在体基质细胞的细胞间连接一致. 电镜显示细胞团富含胶原纤维，平排列，与在体角膜的胶原排列结构相似.定量PCR检测，角膜基质细胞表达基因，FLJ30046， KERA， ALDH3A1， CXADR， PTGDS， PDK4， 他们在细胞团中的表达，比在未分化的人角膜基质干细胞中的表达高100倍。

结论： 应用没有支架的细胞团方式培养人角膜基质干细胞，其表达角膜基质细胞特异的基因，并分泌与在体角膜相似的排列规则的细胞外基质.此种人角膜基质干细胞为角膜组织工程提供了细胞来源.

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