医学图像分析是先进的科学技术在医学应用的一个重要领域。近年来，在国内外眼科肿瘤研究领域中，继应用电镜进行超微结构诊断和免疫组织化学诊断技术之后，进一步开始采用先进的自动图像分析技术（AIAT），已经初步对某些眼部恶性肿瘤，如视网膜母细胞瘤、角结膜缘上皮性肿瘤等进行定量测定分析［1～3］。但是尚无报道将AIAT技术应用于对眼部角结膜缘结膜色素性肿物进行定量分析测定的有关研究。本研究目的旨在应用先进的AIAT技术，从细胞的DNA水平进一步测定分析眼部色素性肿物，借以辅助临床病理诊断，确定病变的生长增殖活性，判别病变的良恶性，用于眼科临床帮助指导眼科医生随访及评估患者的临床预后。

　　众所周知，在常规病理诊断工作中，人们对于组织和细胞的病理变化，往往用定性描述来加以诊断。然而，时常会遇到如何判断某些处于交界性增生和生长活跃病变的增殖活性及良恶性程度的棘手问题。眼部色素性新生物（结膜色素痣、黑变病）系眼科临床常见的增殖性病变，也是研究新生物良恶性以及分级诊断的良好范例，可为深入研究其它良恶性肿瘤奠定有价值的基础。而AIAT技术的问世为解决这一难题提供了切实可行的方法和依据。
　　用石蜡切片进行免疫组织化学染色来分析其免疫表达同DNA含量之间关系的报道很少。
 
　　Melanoma抗体是检测恶性黑色素瘤组织的一种较为特异的标记物。本研究中，全部结膜黑色素瘤病例均呈现阳性结果。结膜色素痣及结膜黑变病的病例中，除各有一例表现为仅有少量细胞弱阳性反应之外，总体上表现为阴性反应结果。同AIAT测定结果相对比，两者之间表现出相符的结果。

　　增殖细胞核抗原（PCNA）是近年来发现的反应细胞增殖的一种很好的标记物。特别是能用于石蜡切片，并很快地被用于肿瘤细胞的增殖活性和对预后的判定。一般认为肿瘤的分化程度越低，其增殖能力越强，恶性程度越高［4］。本研究应用PCNA抗体染色结果表明，恶性肿瘤组织的细胞增殖率明显高于良性肿瘤。全部结膜黑色素瘤病例均呈阳性染色结果。而在结膜色素痣和结膜黑变病的病例中，仅有部分病例中有部分或少量的痣细胞染色弱阳性或阳性，虽然在一定程度上反映了病变的增殖情况，但其阳性反应的程度和着染范围远不及结膜恶性黑色素瘤。经AIAT测定分析，亦证实了这一结果。本研究亦表明，PCNA在常规石蜡病理切片上能够敏感地检测肿瘤细胞的增殖状态。

　　已有研究表明［5］，P53蛋白是P53基因编码的产物，经免疫组化法所表达的均为突变型P53基因蛋白。P53蛋白的过度表达同肿瘤的恶性度和恶变倾向有关。本研究结果显示，结膜黑色素瘤病例除2例外均为阳性结果。全部结膜色素痣和结膜黑变病的病例，均表现出阴性的结果。
 
　　近年来的研究表明，肿瘤细胞内DNA含量与其生物学行为密切相关，DNA倍体的异常同肿瘤的发生发展及其临床病理特性有着重要的联系，在对临床预后的估价上也具有重要作用［4，6，7］。此技术依据病变组织细胞核内物质发生的质和量的变化，可客观、量化地反映出新生物的增殖活性和生长趋势［8］，有利于判别病变的良恶性［7～9］。细胞内DNA含量与肿瘤病理因素之间的关系一直是许多研究者关注的问题之一［4，5］。文献报道，大多数实体肿瘤细胞DNA含量同病理因素密切相关；肿瘤细胞中的异倍体是恶性肿瘤特征性的标志之一，异倍体随着组织学分级的增高和恶性度的增高而增大［2，3，10］。本研究结果亦充分证实了这一论点。

　　本研究结果表明，结膜色素痣中，2C～4C细胞占88.27％，5C细胞及AN细胞仅占11.73％；结膜黑变病中，2C～4C的细胞为82.08％，5C细胞及AN细胞仅占17.92％；而结膜恶性黑色素瘤的病例中，2C～4C细胞仅占8.77％，5C细胞及AN细胞的比例则高达91.23％。进一步分析结膜色素痣呈交界痣或复合痣改变的病例中，有些病变随其细胞增生活跃程度的不同，其2C～4C细胞的比例也表现出不同。光镜下病变表现为交界性增生或增生活跃外观的病变，其2C～4C细胞比例较一般良性增生的色素痣病变中所占比例明显减少，而5C细胞及AN细胞比例增加，提示该病变目前处于增生活跃状态，甚至可能有恶变趋势。
 
　　结膜黑变病中有2例光镜下诊断为生长活跃的病例，经DNA含量测定发现，其5C细胞和AN细胞含量可分别达到22.0％和42.86％。

　　本研究说明，有些病变尽管目前在光镜下尚不能诊断为恶性，但其生物学行为上已有增生活跃或者恶变的潜势，因为细胞中DNA异倍体的出现可以发生在明显的形态学改变之前。因而提醒眼病理医师及临床医师注意，在临床上应密切观察随诊病人。本研究结果表明，对肿瘤病变进行细胞内DNA含量的定量测定分析，将有助于弥补普通光镜下常规病理诊断的缺陷和不足，进一步确定病变的生物学特性和生长增殖活性，提高病理诊断的完整性和准确性，并可对病变的临床发展趋势作出较为客观的评估。

　　本课题由北京市科干局北京市青年科技骨干培养基金资助

　　4　参考文献

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　　［2］　李　彬，李辽青，孙宪丽，等.角结膜缘上皮肿瘤细胞核仁组成区嗜银蛋白定量测定的图象分析.中华眼科杂志，1996，32：429～431.

　　［3］　李　彬，李辽青，孙宪丽，等.角结膜缘上皮性肿瘤DNA含量测定对于病理诊断的意义.眼科，1996，5：48～51.

　　［4］　李基业，陆连荣，张双喜，等.进展期胃癌DNA含量与生物学特性和预后的关系.中华病理学杂志，1994，23：135～137.

　　［5］　原志庆，姜红光，许春雷，等.食管鳞状细胞癌DNA倍体异质性研究及其临床病理学意义.中华病理学杂志，1996，25：159～161.

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　　［7］　来茂德，陈培辉，周水云，等.肝癌细胞核DNA含量及形态计量研究.中华病理学杂志，1995，24：318～319.

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