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2结果
高眼压组右眼术后各时间点眼压较术前明显增高,差异有统计学意义(F=86.93,P<0.05) 。高眼压组右眼术后各时间点眼压与其左眼、正常对照组眼压比较,差异均有统计学意义(F=97.21, 40.72, 83.85, 95.82, 48.63 及44.37,均P<0.01) (表1)。而术后1wk眼压基本稳定。光学显微镜下观察大鼠眼球壁及视网膜各层组织结构情况，可见随着高眼压时间的的延长，视网膜出现水肿，128h后出现视网膜变薄，内核层细胞排列紊乱(图1)。
图1光学显微镜下观察大鼠眼球壁及视网膜各层组织结构(HE染色×400）（略）
A：正常对照组;B：术后2h组;C:术后6h组;D:术后12h组;E:术后24h组;F:术后72h组;G:术后128h组
表2大鼠术后左右眼在各时间点RGC阳性细胞数及阳性率（略）
经χ2检验，术后2,6,12,24h;3,7d，高眼压组右眼RGC阳性率与其左眼及正常对照组右眼和左眼比较，差异有统计学意义（χ2＝304.45,424.62,743.28,937.67,1106.39,1408.03,均P<0.01）。高眼压组术后各时间点的RGC阳性率间比较，差异有统计学意义（χ2＝932.10,P<0.01）
图2免疫组化染色检测视网膜中HSP60的表达（略）
2.1血清HSP60抗体含量 通过标准曲线计算出ELISA检测结果,可见术后1wk,高眼压组血清中HSP60抗体在眼压升高后短时间内增强,以后略高于正常水平(图2)。
2.2视网膜中HSP60的表达 HSP60阳性表达主要显示为RGC胞质呈棕黄色,偶可见少数RGC胞核着色。尽管在正常对照组的左、右眼视网膜血管壁中,均可见少许HSP60阳性染色,但在正常情况下仅有极少数的RGC呈现HSP60阳性染色,在视神经纤维层中未观察到HSP60的阳性染色反应。随着眼压的升高及高眼压的持续, 高眼压组右眼视网膜中呈HSP60阳性表达的RGC染色强度及数量均较其左眼和正常对照组右眼、左眼明显增强,视神经纤维层中也呈现HSP60的阳性表达(表2) 。免疫组化染色证实眼压升高可致RGCs及神经纤维层中内源性HSP60的表达增强（图3）。
3讨论
热休克蛋白与青光眼视神经保护的研究日益受到科学研究者们的重视，其保护神经的机制包括：（1）通过分子伴侣作用在蛋白质代谢过程中发挥着极其重要的作用[2]。分子伴侣作用的主要功能包括：帮助新合成蛋白质的折叠，防止其相互聚集，帮助蛋白质的细胞内移位，帮助变性蛋白质复性以及清除严重受损的蛋白质[3];(2)帮助细胞对抗凋亡刺激因素侵袭，HSP70是细胞凋亡的主要抑制者[4,5];(3)保护线粒体使之免受活性氧族的毒害作用[6]。
我们模拟青光眼高眼压的环境，探讨急性高眼压条件下HSP60在视网膜上的表达及与视神经节细胞的关系，从而对于视神经的保护的可能性的作用。当眼内压急剧升高时，视网膜静脉血流由于机械受压停止，RGC处于缺血和机械受压应激状态下，在缺血再灌注2h后细胞内的HSP60的表达开始增加，并逐渐加强，至24h达高峰，3d后开始减少。由此说明HSP60是一种应激蛋白，且其蛋白的保护作用具有时间依赖性。
图3免疫组化染色视网膜中HSP60的表达（略）
A：正常对照组;B：术后2h组;C：术后6h组;D：术后12h组;E：术后24h组; F:术后72h组;G：术后128h组
【参考文献】
1 Tezel G, Hernandez M, Rosario DDS. Immunostaining of heat shock proteins in the retina and optic nerve head of normal and glaucoma eyes. Arch Ophthalmol 2006;118(4):511518
2仝佳,王胜军,肖寿华.热休克蛋白及其在眼部疾病中作用的研究进展.国际眼科杂志2006;6(1):152157
3 Kampinga HH, Kanon B, Salomons FA. Overexpression of the cochapemne CHIP enhances Hsp70dependent folding activity in mammalian cells. Mol Cell Biol2003;23(14):4948 4958
4 Javid B, MacAry PA, Lehner PJ. Structure and function: Heat shock proteins and adaptive immunity. J Immunol2007;179(4):20352040
5 Hartl FU. Molecular chaperones in celluar protein folding. Nature 1996;381(6583):571579
6 Caprioli J, Kitano S, Morgan JE. Hyperthermia and hypoxia increase tolerance of retinal gangle cells to anoxia and excitotoxicity. Invest Ophthalmol Vis Sci1996;37(12):23762381
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