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2结果
2.1角膜植片改变 各组角膜植片透明度、水肿度、新生血管以及总RI的评分: B，C组与A组相比P＜0.05，B与C组间相比P＞0.05（表1）。大鼠角膜移植植片平均存活时间：B，C组与A组相比P＜0.05（表1）。各组发生角膜移植KaplanMeier生存率曲线（图1）及术后角膜照片（图2AC）。
2.2病理学检查 HE染色可见15d时A组角膜植片增厚，角膜上皮细胞增厚，基质中可见大量的淋巴细胞浸润及新生血管形成，缝线处可见异物巨细胞（为吞噬细胞）反应，板层细胞排列不规则；30d时角膜基质变薄，新生血管萎缩，瘢痕形成。B，C组15d可见角膜植片厚度基本正常，角膜上皮完整，基质中仅有少量淋巴细胞浸润，新生血管少见，板层角膜基质细胞排列规则；30d时角膜基质增厚，淋巴细胞和新生血管增多，此时与A组15d时病理表现相似(图3A,B)。 15d，CD25, CD+54在基质中的表达A组明显多于B,C组。30d，这两种细胞因子的表达在B,C组中明显增加，在A组中减少（图4A，B）。
3讨论
雷公藤原产我国，产量大，价格便宜，具备较强的抗炎和免疫抑制功能，但全身应用对身体多器官、组织有不同程度的毒性副作用，雷公藤多甙虽毒副作用减轻，但全身用药，特别是长期用药仍有一定的副作用。我们首次研制出TII滴眼液，局部防治角膜移植排斥反应，发现局部应用TII滴眼液，不仅能避免雷公藤制剂全身应用所带来的毒副作用，还有显著的抗角膜移植免疫排斥反应的功能。我们模型是应用封闭群（closed colony）动物SD和Wistar大鼠之间的角膜移植，有类似人类群体遗传异质性的特点，本研究用封闭群大鼠替代近交系大鼠建立同种异体角膜移植模型是可行的。我们首次应用了0.3g/L TII滴眼液，该浓度的制定是参考雷公藤甲素（T10）滴眼液产生局部毒性的浓度[8]和全身应用抑制动物实验性体内炎症的半数有效量(TII剂量约是T10的300倍)[10]，即当选定T10滴眼液浓度为1mg/L时，TII滴眼液相应的浓度为300mg/L。本研究从结果中可以看出0.3g/L TII滴眼液对角膜排斥反应的抑制在各个指标评价中与0.5g/L FK506滴眼液疗效近似。其原因可能是由于TII有多种抗炎及抑制免疫的组份。IL2主要由T细胞或T细胞系产生。CD25是活化T淋巴细胞的标志。当角膜移植发生免疫排斥时，同种异体抗原主要刺激CD4阳性T细胞分泌IL2。因此，IL2在角膜移植片中基质层的多少可间接反映出移植片中T细胞的浸润数量及免疫排斥发生的程度。ICAM1广泛表达于白细胞、巨噬细胞和成纤维细胞上，可作为反映角膜移植片中炎症细胞浸润程度的客观指标，其表达的多少在角膜移植排斥反应发展进程中起重要作用[11]。应用TII滴眼液后15d组植片中的IL2,ICAM1的表达明显少于同一时间的A组，表明TII滴眼液可通过抑制T细胞和炎症细胞的浸润来抑制角膜抑制排斥反应的发生。这与体外TII对T细胞周期中的各个关键点均有抑制作用[12]，在转录水平上抑制Th细胞IL2和IL2 Rp55基因表达，并能促进IL2 mRNA降解[13]，以及抑制单核细胞和淋巴细胞炎性细胞因子TNFα的产生等[12]研究结果相一致。
表1大鼠角膜移植术后植片的评分以及平均存活时间（略）
图2大鼠角膜移植后15d外观（×16）（略）
A: A组; B:TII组植片透明;C：FK506组
图3大鼠角膜移植后15d病理学检查（HE×80）（略）
A:A组植片增厚，大量炎性细胞浸润; B:B，C组植片厚度基本正常，基质中仅有少量淋巴细胞浸润
图4大鼠角膜移植后15d CD25和CD+54明显表达（SABC×100）（略）
A:A组角基质中明显增多; B:B,C组未见明显表达
TII滴眼液的研制成功不仅可应用于防治角膜移植排斥反应，而且对于治疗眼前部其它各种免疫性眼病，如：前部葡萄膜炎、巩膜炎、免疫性角膜病、春季卡他性结膜炎、青睫综合征等以往需用激素治疗的疾病，提供了新的治疗途径和前景。不仅避免了雷公藤制剂全身应用所带来的副作用，扩展了其应用对象（如：针对雷公藤不能全身应用的妊娠妇女），而且提高了眼组织局部的有效药物浓度，为小剂量长期应用提供了可能性。
【参考文献】
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11 Whitcup SM, Nussenblatt RB, Price FW, et al. Expression of cell adhesion molecules in corneal graft failure. Cornea1993;12(6):475 480
12朱立平,董彦章,蒋明,等.雷公藤总甙在细胞周期多个阶段抑制T细胞增殖.中国免疫学杂志 1992;8:379382
13吴福国,朱力平,崔莲仙,等.雷公藤总甙（TII）对IL2和IL2R基因转录的影响.中华微生物学和免疫学杂志 1993;13:193196
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