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2结果
2.1角膜新生血管(CNV)
大鼠角膜碱性烧伤后,裂隙灯显微镜下观察,实验组角膜新生血管出现的时间为 1.40±0.05d,迟于对照组1.25±0.10d,两者差异无显著意义(P>0.05)。角膜碱性烧伤后1，3，5，7d,两组角膜新生血管区的面积及最长角膜新生血管长度分别进行方差分析,发现伤后1d和3d两者差异无显著性（P>0.05）；在伤后5d和7d，两者有显著性差异（P<0.05，表1）。表1大鼠眼碱性烧伤后CNV生长长度和面积（略）
2.2角膜形态学
角膜碱性烧伤后，即可见角膜中央区出现一个与滤纸片直径相同的、边界清楚的灰白色混浊区。裂隙灯下观察发现，伤后1d和3d，实验组和对照组角膜溃疡及新生血管生长情况基本平行；伤后5d，两组角膜损伤面积及损伤深度均有所增加，但对照组程度比实验组严重很多，角膜表面布满了新生血管，有一眼发生前房积脓，两眼发生角膜穿孔。伤后7d，实验组和对照组损伤面积减小，角膜溃疡有所修复。实验组角膜新生血管(CNV)细小,稀疏,管径细,多集中于上角膜缘和下角膜缘,无一例生长达烧伤区。对照组角膜新生血管粗乱,密集成堆,不易分辨,所有新生血管均长入角膜碱性烧伤区,有5例达到角膜碱性烧伤斑的对侧（图1）。
2.3透射电镜检查结果
实验组碱性烧伤后7d，角膜上皮缺损，再生上皮厚薄不均匀，一些区域细胞极向排列不清，细胞间距宽，形成宽窄不一的裂隙，细胞间桥粒结构明显减少，一些区域消失。线粒体、粗面内质网和游离的核糖体增加，也能见到成束排列的微丝。底层细胞形态不规则，其下基底膜连续性中断，半桥粒结构不明显，一些区域见上皮下有不规则裂隙（图2A1,A2）。对照组碱性烧伤后7d，除了出现与实验组相同的改变外，还可见在角膜的基质内，可见新生血管形成，形态多样，许多新生毛细血管被基质中新生的胶原纤维所围绕，毛细血管壁增厚，腔内可见红细胞。基质内胶原原纤维有明显改变：胶原原纤维粗细不等，排列紊乱，间隙大小不均，可见红细胞。新生血管内含有许多炎性白细胞，角膜的实质内亦有大量的炎性白细胞的浸润（图2B1,B2）。
3讨论
角膜内无血管是维持角膜透明和角膜免疫赦免（immune privilage）的必要条件。在一些病理情况下如缺氧、炎症、感染及外伤等均可诱发角膜新生血管而破坏角膜的完整性并造成不良后果。研究表明，新生血管的形成是多因素参与的结果，这些因素包括炎症介质、细胞因子、生长因子和MMP等[4]，其中血管内皮细胞、角膜上皮和内皮细胞产生的MMPS对新生血管的发芽及血管内皮细胞在角膜实质内的移动有着重要作用[5]。
碱性烧伤后角膜溃疡的形成极大程度上是蛋白水解酶作用的结果。在诸多的蛋白水解酶中，最主要的是MMP。MMP是在结构上，具有极大同源性的一组锌离子依赖的内肽酶家族[6,7]。MMP在角膜组织中是以无活性的酶原形式存在，受蛋白分解作用的刺激而激活，其活性可被MMP抑制剂所抑制[2]。目前所知的能抑制MMP表达的物质不多。GM6001使一种新合成的MMP抑制剂[8],它的分子结构为｛N2(R)2(hydroxamidocarbonylmethl)4methlpentanoyl〕Ltryptophane methylamide｝。Masferrer等[9]用不同浓度的GM6001滴眼液对严重碱性烧伤兔角膜进行治疗，也取得了与本研究类似的良好疗效。
碱性烧伤后角膜新生血管增殖分3个阶段[10]：1）潜伏期：伤后24h内角膜缘血管网扩张，通透性增强，血管内炎性细胞聚集、黏附、渗出、趋化至烧灼区；2）血管形成期：碱性烧伤后27h角膜缘血管网有血管芽生长，3d后长入角膜，此期新生血管生长速度最快；3）血管退行期：烧伤后7d，新生血管延伸停滞，许多已形成的新生毛细血管被吸收，血管密度下降。故我们选择碱性烧伤后1，3，5，7d观察大鼠角膜溃疡及角膜新生毛细血管（CNV）的生长情况。我们通过建立大鼠角膜碱性烧伤模型明确了碱性烧伤后基质金属蛋白酶抑制剂GM6001对角膜溃疡的发生及角膜新生血管的发生有明显的抑制作用，为临床合理地应用GM6001提供了实验依据。
【参考文献】
1 Fleming I, Fisslthaler B, Michaelis UR, et al. The coronary endotheliumderived hyperpolarizing factor (EDHF) stimulates multiple signalling pathways and proliferation in vascular cells. Pflueqers Arch2001;442:511518
2 Mnzenmaier DH, Harder DR. P450 epoxygenase and NO synthase inhibitors reduce cerebral blood flow response to NmethylDaspartate. Am J Physiol2000;278:H11631167
3 Cheng T, Cao W, Wen R, et al. Management of coronary artery fistulas: percutaneous transcatheter embolization versus surgical closure. Invest Ophthalmol Vis Sci1998;39:581591
4 Van Wauwe J, Van Nyen G, Cools W, et al. NADPHdependent formation of 15 and 12hydroxyeicosatrienoic acid from arachidonic acid by rat epidermalmicrosomes. Eicosanoids1991;4:155163
5 Pfister RR. Corneal stem cell disease: concepts, categorization, and treatment by autoand homotransplantation of limbal stem cells. Clao J1994;20:6472
6黎黎,秦莉,裴澄.基质金属蛋白酶在角膜疾病中的作用.国际眼科杂志 2006;6(1):169172
7栗映梅,申家泉.基质金属蛋白酶及其组织抑制因子与眼病的相关性研究时展.国际眼科杂志 2007;7(4):11351138
8 Fini ME, Girard MT, Matsubara M, et al. Unique regulation of the matrixmetalloproteinase, gelatinase B. Invest Ophthalmol Vis Sci1995;36(3):622633
9 Masferrer JL, Rimarachin JA, Gerritsen M E, et al. 12(R)hydroxyeicosatrienoic acid, a potent chemotactic and angiogenic factor produced by the cornea. Exp Eye Res1991;52:417424
10 Ronk JF, RuizEsmenjaud S, Osorio M, et al. Limbal conjunctival autograft in a subacute alkaline corneal burn. Cornea1994;13(5):465468 上一页 [1] [2] |
