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眼科疾病的模型 两例克隆兔

http://www.cnophol.com 2009-8-26 10:00:50 中华眼科在线

  7月15日,作为胎兔成纤维细胞克隆试验的主持人,李善刚从上海返回北京。在上海,除了看望已经健康成长了5个月的“兔宝贝”之外,他也开始了下一步的工作——转基因克隆兔试验。

  4月30日,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所国家畜禽分子遗传育种中心宣布,来自胎儿成纤维细胞的克隆兔通过了分子生物学鉴定,这标志着世界上首例胎兔成纤维细胞克隆试验在我国获得成功。

  两个“世界首例”克隆兔

  2007年2月12日,上海交通大学医学院实验室,李善刚亲自操刀,为克隆兔的“代理妈妈”进行剖腹产,在整个胎兔成纤维细胞克隆试验过程中,这是第十次了。

  “这一次我们获得了成功,确实很高兴。”时隔5个月,再说起当时的心情,李善刚的语气十分平淡。

  “这次的胎兔体细胞克隆实验,我们用妊娠期20天的胎兔,剪取它的背部皮肤,进行培养获得成纤维细胞系;对成纤维细胞进行血清饥饿处理后,当作供体细胞与去核的兔卵母细胞进行电融合,重构胚胎激活后培养至4细胞胚胎;然后移入假孕的母兔,也就是‘代理妈妈’的体内;妊娠到期后,对它进行剖腹产,获得克隆兔。”比起对成功的回味,介绍试验过程,李善刚讲得更加津津有味。

  兔子适合研究心血管疾病和眼科疾病及一些遗传疾病的模型。利用转基因技术可克隆技术获得转基因兔有重要的研究价值。但家兔的克隆是一个世界性难题。自克隆羊多利诞生以后,虽然世界多个小组开始克隆兔研究,只有法国国立农业研究院于2002年报道获得来自性成熟母兔颗粒细胞的克隆兔。2006年,李善刚领衔完成了世界首例成年公兔耳组织成纤维细胞的克隆兔试验。此次用胎兔成纤维细胞制作获得存活的克隆兔也是世界首例。

  一颗“科研平常心”

  在李善刚的电脑中,存着许多克隆兔的照片,但其中一些浑身青紫、一团褶皱的主角,怎样也无法让人联想到雪白可爱的兔子。

  “刚生下来的小兔子就是这样的,看多了就不会觉得丑了,我第一次见到克隆兔的时候,甚至还觉得它很漂亮呢。”李善刚笑着说。

  2005年,当时在读博士的李善刚正在进行兔子干细胞的实验,一个偶然的机会,他进行了核移植的胚胎的移植工作。也就是这个偶然的机会,他获得了克隆兔,并进入了克隆兔这个领域,做出了两个世界首例。

  “科研就是这样,你不可能知道哪个方向一定会出成绩,常常是你认为这个方向一定能做出来,反而出不来东西。”

  正像李善刚说的,当他专注于克隆兔的试验后,进展并没有想象中的顺利。胎兔成纤维细胞克隆试验整整做了十次才成功,但前九次的失败没让他有过丝毫的气馁。“我对整个试验系统非常的有信心,成功只是时间和运气的问题。”

  曾被称为“克隆羊之父”的伊恩·威尔莫特在参观李善刚的实验室之后,留下一句“Goodluck”。“做动物试验的人都知道,有时候运气会跟你开一些玩笑。”李善刚说,“有时候做一次就能成功,有时候做十次也没有结果。”在他看来,搞科研首先要学会承受失败,虽然当打开克隆兔“代理妈妈”的肚子,如果里面空空如也,心情也会有一时的沮丧。

  “科研如果是能够预言的,那就不叫科研了,所以保持平常心很重要。”李善刚说。

  两年练就“体力活儿”

  对于无法预测的事情,李善刚并不强求,但是只要是能够掌握的,他一定会做到最好。实验中的每个步骤他都力争亲历亲为,甚至有些“大包大揽”。

  每隔一个月,李善刚会从北京飞到上海,一头扎进实验室忙个昏天黑地。虽然也曾在上海读过四年书,但他对上海的了解似乎也仅限于学校中实验室和宿舍的两点一线。现在到了上海,除了实验就更没有别的内容了,虽然辛苦,但李善刚也乐在其中。

  “做核移植确实挺累的。”李善刚说。

  所谓核移植,就是将一个细胞核用显微注射等方法移到另一个细胞里去。前者为供体,可以是胚胎的干细胞核,也可以是体细胞的核。受体大多是动物的卵子。因卵子的体积较大,操作容易。因此细胞核移植技术,主要是用来研究胚胎发育过程中,细胞核和细胞质的功能,以及二者间的相互关系;探讨有关遗传,发育和细胞分化等方面的一些基本理论问题。

  这是整个克隆试验的关键一步,动辄要在显微镜下操作长达七八个小时。“全神贯注的保持一个姿势,好几个小时不活动,你想想那是什么滋味。”有人说核移植是个精细活儿,在李善刚看来这其实是个体力活儿,他笑称,做核移植需要点“功夫”。

  为了掌握这门“功夫”,李善刚曾经“苦练两年”,“现在已经做得比较顺手了,一般情况下,四个小时就能完成。”

  然而,“摸索阶段”李善刚也出过纰漏,怎么养好小兔子就曾让他十分头疼。

  “克隆兔顺利的生出来并不意味着什么。”李善刚说,只有兔子健康的过了满月,才能说明试验成功。而曾经就有小克隆兔因为出生后照料不佳夭折,“如果当时懂得怎么科学喂养,这个实验可能更早取得成功。”自那以后,李善刚“恶补”兔子的饲养知识,在网上查资料,到养殖场学习,很是下了一番功夫。如今,照片中,顺利成活的世界第一只胎细胞克隆兔浑身雪白,体重已达到两公斤,和它的“代理妈妈”紧紧地靠在一起。

  方向明确就没有压力

  由于核移植实验在上海进行,李善刚免不了要两地奔波,再去上海,他已经有了新的任务。“我们下一步要研究一种基因缺失和智力发育低下、有自虐倾向的疾病的关系,可以把兔子的这个基因去除,看培养出的兔子是否会有同样的病症。”李善刚说,弄清基因与疾病的关系对于研究这种遗传病的致病机理和寻找有效的治疗办法至关重要。

  紧张的工作,两地的奔波,对他来说好像不算什么。“做自己愿意做的事情会有什么压力呢。”在李善刚看来,只有找不到方向的时候,才会感觉到压力。“我们国家克隆生物技术的技术水平还是不错的,因为中国的人手巧啊,在这个领域我们一定会有大的发展。”

  接下来的转基因、基因打靶都已经排在试验日程上了,虽然他不愿意说多久之后会再传佳音,但能感到,对接下来的工作,李善刚信心满怀。

  ■采访手记

  李善刚不是一个健谈的人,采访中,只要话题稍稍偏离工作,他就会笑着提醒:“这就说得远了吧。”但有着山东人直爽性格的他,经不住记者的旁敲侧击,难免也会聊聊自己。

  如果除去“世界首例胎兔体细胞克隆实验主持人”的头衔,李善刚就像一个你身边再普通不过的朋友。

  采访已近尾声,和李善刚聊起了北京的楼市,不得不面对购房压力的他,分析起房价起伏、楼市涨跌也是头头是道。他喜欢和7岁的儿子一起游戏却没有足够的时间,曾经着迷物理而现在只是偶尔翻翻《时间简史》,希望回家过年却因车票难求而作罢,回忆起当老师的经历,也会为“只拿一支粉笔就能上讲台”而“沾沾自喜”……

  · 人物档案

  李善刚,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所国家畜禽分子遗传育种中心博士后,世界首例胎兔体细胞克隆实验主持人。1995年毕业于山东农业大学,获学士学位。1995年考入山东农业大学动物繁殖学专业学习,参加了山东省自然科学基金“转基因鸡的研究”,获得了国内第一列嵌合体鸡;1998年毕业于山东农业大学获硕士学位;参加山东省自然基金重大项目“鸡胚胎干细胞的建系及其遗传操作的研究”。2002年考入上海交通大学发育生物学专业学习,2004年开始克隆兔的研究工作,2005年在国际上首次利用培养的成纤维细胞克隆兔成功,2006年首次利用兔类胚胎干细胞克隆兔成功。2006年毕业于上海交通大学,获医学博士学位。同年7月进入中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,在合作导师杜立新教授的支持下开始博士后研究工作,从事家兔体细胞克隆和家畜繁殖性状分子生物学机制研究工作。

  来源:科技日报

(来源:互联网)(责编:xhhdm)

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