3 讨论

　　干眼症作为发病率较高的的眼科疾病之一，其发病原因复杂多样。激素缺乏、年龄、自身免疫性疾病、环境、角膜接触镜的配戴、睑缘炎、酒渣鼻和病毒损害等因素共同形成了干眼症的原因。

　　目前干眼的诊断主要依据患者自觉症状以及较为传统的检查方法，例如SchirmerⅠ试验、BUT检查及荧光素染色检查等。虽然这些检查方法简单、经济，但重复性低，易受外界因素的影响。有报道指出，以Schirmer Ⅰ试验值降低为诊断干眼病一主要依据，其重复性差，滤纸、受检者及环境等因素均影响测定结果，可能产生15%的假阳性或假阴性结果[2]。

　　本研究对干眼患者和正常人泪液中溶菌酶及转化生长因子β2进行检测，以寻求灵敏度高、特异度高、成本低、省时、省力的临床检测方法。

　　溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)分子量为14400道尔顿，PI 10.5~11.0[3]，由120个氨基酸残基组成。该酶为一种天然免疫物质，广泛分布于人体泪液、唾液、乳汁、血清以及肝、肾、软骨、淋巴结、骨髓等组织中。

　　1922年，Alexander Fleming最早报道泪液中含有溶菌酶。泪液中溶菌酶浓度较血清约高150~200倍，其产生可能来自泪腺细胞。泪液中的溶菌酶含量在体外分泌液中居首位，是人眼免疫防御系统的重要组成部分。已有研究证实，测量溶菌酶浓度可以判断泪液量，溶菌酶浓度测定比Schirmer Ⅰ试验能更准确地判断泪液分泌功能[1]。

　　溶菌酶的检测方法较多，如①比浊法[4]：采用溶菌小球菌(micrococcus lysodeikticus)为底物。此法对单个样品测定速度快，但操作复杂，精确度较低，实验结果产生的偏差度较大，结果的重现性不好[5]。②琼脂板扩散法[6]：是借鉴抗生素的纸片琼脂平板扩散法测定生物效价的原理建立的一种方法。此法简便，但重复性差，在扩散过程中易受到其他交叉性蛋白的干扰。③比色法[7]：此法结果不够准确，易受主观因素的影响。④琼脂糖火箭电泳法：此法简便、快速，稳定性好，灵敏度高，结果准确可靠。⑤RBB-R染料标记比色法：此法灵敏度较高，重复性较好，检测结果较稳定，适合大批量样品的检测，影响因素少，可控性好。⑥高效液相色谱法[8]：用于测定溶菌酶口腔药膜中维生素B6的含量实验，具有操作简便、快速，重复性好，结果可靠等特点。⑦微量快速比浊法：由于溶菌酶能使溶壁微球菌(mlysocleikticus)溶解，吸光度减低，故其减低的程度与溶菌酶的含量成正比。根据标准曲线可换算出溶菌酶含量。此法采用聚苯乙烯反应板，以酶标仪检测吸光度，具有线性关系好、标本用量少、反应时间短、准确、灵敏度高的特点。

　　本实验应用微量快速比浊法检测正常人组、非干燥综合征和干燥综合征干眼患者泪液样本中泪液溶菌酶的含量，探讨其诊断价值。通过测定溶菌酶使溶壁微球菌溶解后的吸光度，根据标准曲线换算出溶菌酶的含量。微量快速比浊检测溶菌酶的方法具有线性关系好、标本用量少、反应时间短、准确、灵敏度高的特点，适合低浓度酶液的测定[9]。

　　戎冰兰等[10]利用琼脂糖免疫扩散法测得干眼患者泪液溶菌酶低于正常组眼，这与本实验测得的21例非干燥综合征(NSS)患者及15例干燥综合征(SS)患者泪液溶菌酶浓度均低于26例正常对照相符。

　　TGF-β的相对分子量为25 000，在人体中只存在TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3 三种异构体，免疫测定法多采用Dasch等[11]建立的用单抗检测TGF-β1和TGF-β2的夹心ELISA法。

　　TGF-β2是一种多功能肽，既往研究表明，三种亚基中TGF-β2在眼部的作用占重要地位[12-13]。泪腺所分泌的TGF-β2，在泪液中含量相当高[14-15]。2004年Ozcan等[16]用ELISA法测定原发性开角型青光眼患者房水中TGF-β2的浓度。有学者利用Western blot方法检测不同病程动物模型视网膜中TGF-β2的表达。还有学者利用SABC免疫组织化学法对口腔鳞癌TGF-β2的蛋白表达进行研究。

　　本实验利用双抗体夹心ABC-ELISA法检测SS和NSS泪液中TGF-β2浓度，发现它们均低于正常对照组，此差异有显著统计学意义，表明此方法在临床诊断干眼症方面有重要意义。分别绘制泪液中TGF-β2与Schirmer Ⅰ试验及TGF-β2与BUT的回归方程，结果显示TGF-β2与Schirmer Ⅰ和BUT均呈正相关。

　　【参考文献】

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　　[16] Ozcan AA， Ozdemir N， Canataroglu A. The aqueous levels of TGF-beta2 in patients with glaucoma[J]. Int Opthalmol，2004， 25(1)：19-22.

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