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3 讨论
hRPE细胞为眼后节致盲性眼病的主要效应细胞,体外培养纯化RPE细胞为多种眼病发病机制的研究以及RPE移植提供可靠的细胞来源.由于从哺乳动物获取并保持单纯RPE细胞培养十分困难，直到本世纪70年代初才由Alberts等成功完成hRPE细胞培养［9］，我们自90年代以来进行了hRPE细胞的培养，取得成熟的培养方法，并获得了hRPE细胞有限细胞系.本实验采用特异性好、反应灵敏的间接免疫荧光方法，研究本中心建立的hRPE有限细胞系的免疫组化特性，进一步鉴定其纯化程度.
中间丝与维持细胞和细胞器的形态及完整性有关，并参与调节细胞和细胞内的运动［10］.不同组织细胞中间丝表达有差异，角蛋白分布于上皮和上皮来源细胞，波形蛋白主要存在于成纤维细胞和巨噬细胞等，GFAP存在于不同类型的神经胶质细胞，例如星形胶质细胞，肌动蛋白存在于肌细胞和肌成纤维细胞内；VⅢ因子可存在于血管内皮细胞.中间丝不仅分布有组织特异性，而且比较稳定，因而用于对细胞起源和肿瘤细胞的鉴别诊断.我们根据RPE细胞及其解剖毗邻的细胞成分，如成纤维细胞、神经胶质细胞、血管内皮细胞等，可能混杂于分离的RPE过程中而造成RPE细胞纯度降低，采用角蛋白、波形蛋白、GFAP、肌动蛋白以及VⅢ因子等鉴定RPE细胞及其纯化程度.研究结果表明，培养的hRPE细胞始终可稳定表达角蛋白.第1代RPE细胞波形蛋白为弱阳性或阴性，第3～6代细胞则表达波形蛋白阳性，而第VⅢ因子、GFAP，HMB45、肌动蛋白均呈阴性表达.对于传代培养hRPE表达波形蛋白.Virtanen等［11］认为，就神经胶质细胞、上皮细胞而言，原代培养的大多数细胞仅表现为一种组织特异类型的中间丝蛋白，分别为GFAP和角蛋白.在这些细胞模型中，但由原代培养而来的增生细胞以及建立的相应细胞系则包含组织特异性中间丝和波形蛋白中间丝.Franke等［12］认为至少在组织水平上，免疫荧光方法均显示上皮细胞仅表现出细胞角蛋白特异的荧光.Mclellan等［13］在犬类RPE细胞体内、体外研究中也证实传代培养的RPE细胞显示为波形蛋白强阳性.以上结果均显示波形蛋白的出现为细胞适应组织培养条件而出现表型改变.
实验证实传代培养的hRPE细胞可同时表达角蛋白及波形蛋白中间丝，表明本中心建立的hRPE有限细胞系为单纯的RPE细胞，可以作为基础研究及临床应用的细胞来源.(图略)
参考文献
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9 王雨生，严 密，杨抚华. 视网膜上皮细胞培养技术及应用. 中华眼底病杂志,1994;6(2):124-128
10 谢锦玉主编.现代细胞化学技术及其在中西医药中的应用,第1版,北京:中医古籍出版社,1998:196-204
11 Virtanen I, Lehto VP, Lehtonen E et al. Expression of intermediate filaments in cultured cells. J Cell Sci, 1981; 50(1):45-63
12 Franke WW, Schmid E, Winter S et al. Widespread occurrence of intermediate sized filaments of the vimentin-type in cultured cells from diverse vertebrates. Expl cell Res， 1979;123(1):25-46
13 Mclellan GJ, Bedford PG. The cytoskeletal intermediated filaments of canine retinal pigment epithelial cells in vivo and in vitro， Res Vet Sci， 1997;63(3):245-251 上一页 [1] [2] |
