【摘要】 目的 探讨2型糖尿病醛糖还原酶（AR）基因5′端(AC)n多态性与2型糖尿病（DM）并发背景型视网膜病变（BDR）的关系。方法 随机选取DM患者74例，其中并发BDR39例，无视网膜病变35例，正常对照组40例。经多聚酶链反应（PCR）琼脂糖凝胶电泳，检测AR基因5′端（AC)n多态性标记。结果 ① 在2型糖尿病患者和正常对照组中共检测出7种等位基因，其中以Z、Z＋2、Z-2三种等位基因最常见。② Z-2等位基因在BDR组高于NDR组和CON组；Z+2等位基因在BDR组低于NDR组和CON组。结论 山东地区2型DM患者AR基因5′端 (AC)n存在7种等位基因，Z-2等位基因可能是BDR的易感基因，Z+2等位基因可能为其保护基因。
【关键词】 糖尿病，2型；醛糖还原酶；基因；视网膜病变
Abstract： Objective To study the relationship between polymorphism of (AC)n in the 5′end of the AR gene and background diabetic retinopathy(BDR). Methods 74 patients with diabetes mellitus (DM), 39 with BDR and 35 without, and 40 controls were enrolled in this study. PCRagarose gel electrophoresise was used to determine the polymorphism marker of (AC)n dinucleotide in the 5′end of the AR gene. Results ① 7 alleles, mostly Z, Z＋2, and Z-2 alleles were observed in type 2 diabetes mellitus and controls. ② Frequency of allele Z-2 was significantly higher in the BDR group than in the nondiabetic retinopathy(NDR) group and the control group, however, frequency of allele Z+2 was significantly lower in the BDR group than in the NDR group and the control group. Conclusions 7 alleles were found in the 5′end of the AR gene in type 2 DM patients in the Shandong area, of them, the Z-2 allele might be the susceptible gene and the Z＋2 allele might be the protective gene.
Key words： Diabetes Mellitus, type 2; Aldose Reductase; Genes; Retinopathy
糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是糖尿病微血管病变在眼底独特环境中的表现，已成为发达国家成年人致盲的最重要的原因，大约21%的2型糖尿病患者在诊断之时即存在视网膜病变，并且大部分患者在整个病变过程中会出现程度不等的视网膜病变［1］。近十年的研究已经证实，长期慢性高血糖是导致糖尿病微血管并发症的主要原因，且通过三种途径起作用：醛糖还原酶（aldose reductase， AR）的激活，蛋白激酶C的活化和非酶糖基化蛋白的堆积。在糖尿病高糖状况下，多元醇通路过醛糖还原酶基因多态性与2型糖尿病及视网膜病变的相关性度激活对糖尿病慢性并发症的发生起重要作用。AR是多元醇代谢途径的限速酶，该酶基因表达异常或酶活性改变，势必影响糖尿病微血管并发症的发生。Ko等［2］对居住香港的中国人T2DM患者进行分析，发现AR基因5′端有一个微卫星多态性，并且此多态性与增殖型糖尿病视网膜病变有关。此后的一些非中国籍人群的研究［35］，也同样发现基因微卫星多态性与2型糖尿病视网膜病变有一定的关联。本研究旨在探讨山东地区2型糖尿病患者非增殖型视网膜病变与AR基因5′端的(AC)n的多态性的相关性。
1 资料与方法
1.1 研究对象
糖尿病组：按照1997年美国糖尿病协会（American Diabetes Association, ADA）的糖尿病诊断和分型标准，随机选择千佛山医院2006年7月～2007年6月住院及门诊2型糖尿病患者74例，其中男42例，女32例，平均年龄（59.2±12.1）岁。经临床检查排除糖尿病急性并发症、感染、手术等应激情况，无其他慢性肾脏疾病、高血压、冠心病和恶性肿瘤。所有患者均由2名特定的眼科医生经扩瞳直接眼底镜检查眼底，部分患者行眼底荧光造影，依照1985年全国第三届眼科学会议标准排除增殖型糖尿病视网膜病变者，分为：① 背景型视网膜病变（background diabetic retinopathy, BDR）者39例，男23例，女16例，平均年龄（59.6±11.3）岁，平均病程（3.4±1.3）年；② 糖尿病无视网膜病变（nondiabetic retinopathy, NDR）者35例,其中男19例，女16例，平均年龄（58.7±13.1）岁，平均病程（14.4±3.1）年。正常对照(CON)组:40例，男22例，女18例，平均年龄（56.8±13.5）岁，均为无糖尿病、糖耐量异常、高血压、冠心病、肥胖及其它眼底病变，3代内无糖尿病家族史的同期健康体检者。
1.2 方法
1.2.1 一般临床资料
所有研究对象均测量身高、体重，并计算体重指数（Body Mass Index，BMI）。全自动生化仪测血脂、血糖。高压液相法测糖化血红蛋白。
1.2.2 DNA提取
取2%EDTA抗凝的外周静脉血1?mL，应用北京天根公司TIANamp Blood 血液基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。
1.2.3 PCR扩增目的基因片段
5′端及3′端引物分别为ARPr1：5′GAA TCT TAA CAT GCT CTG AAC C3′,ARPr2:5′GCC CAG CCC TAT ACC TAG T3′，由上海博亚生物有限公司合成。扩增条件为94?℃始变性5?min，94?℃变性30?s，55?℃退火45?s，72?℃延伸90?s，共循环30个周期，72?℃终末延伸10?min。反应总体积为50?μL：5?μL10×PCR缓冲液，0.25?μg模板DNA，两个引物各1?μmmol/L，4种dNTPs各0.15?mmol/L，TapDNA聚合酶1?U，加无菌蒸馏水至50?μL反应体积。
1.2.4 PCR反应产物电泳
反应产物在1%琼脂糖凝胶上电泳，根据迁移距离确定样品所属等位基因。本研究把扩增出的138?bp长的DNA片断命名为Z等位基因，那么Z+2等位基因将比Z等位基因长(AC)2个bp，Z-2等位基因将比Z等位基因短(AC)2个bp，并依次类推［6］。
1.3 统计学处理
临床计量资料采用±s表示，组间比较用t验。AR等位基因数目用直接计数法，并计算等位基因频率分布用χ2检验，检验水平为P＜0.05差异有统计学意义。
[1] [2] 下一页 |
