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2 结 果
2.1 病例及对照组一般临床及实验室资料
见表1（略）。3组间性别构成、年龄、体重指数、糖尿病家族史均无差异，具有可比性，为了清除病程对微血管并发症的影响，本研究入选的NDR患者病程均＞10年，平均（14.4±3.1）年,与BDR相比差异有统计学意义（P＜0.001）。NDR组、BDR组与CON组相比，空腹血糖（FBS）、糖化血红蛋白（HbA1c）均明显升高。
2.2 PCR反应产物电泳结果
CON组和糖尿病组均发现7种等位基因：Z-6、Z-4、Z-2、Z、Z+2、Z+4、Z+6。各等位基因间长度差异为2?bp，亦即由Z-6等位基因至Z+6等位基因长度为132?bp～144?bp。选择泳动在138?bp的纯合子（Z/Z）等位基因的PCR产物进行DNA测序，结果证实AC重复次数为24（见图1、图2）。因此推算，Z-6、Z-4、Z-2、Z+2、Z+4?和Z+6等位基因（AC）n中n分别为21、22、23、25、26、27。
2.3 7种等位基因在各组中的分布频率
与NDR组相比，BDR组的Z-2等位基因频率显著增加，而Z+2?等位基因频率在BDR组显著低于NDR组，见表2（略）。
3 讨 论
AR属于NADPH依赖型醛-酮还原酶家族，存在于多种组织中，是多元醇通路的限速酶，其活性升高在DR的发生、发展中起重要作用。正常血糖浓度时，该酶活性不高，葡萄糖进入细胞后很快被已糖激酶转变为6磷酸葡萄糖，而后进入三羧酸循环，为细胞代谢提供能量，也可经酵解或戊糖旁路代谢。但糖尿病时，血糖浓度升高超过了以上通路的代谢能力，致使大量葡萄糖经多元醇通路，即AR将醛糖转化为山梨醇和果糖，山梨醇和果糖不易通过细胞膜向外扩散，聚集在细胞内，引起组织结构和功能异常，影响血管通透性，使毛细血管基底膜增厚，最终导致视网膜微动脉和毛细血管结构上的改变：周细胞变性、基底膜增厚和内皮细胞增生。这些改变为非增殖型糖尿病视网膜病的特征性表现［7］。本研究结果显示，BDR组、NDR组FBS水平（9.51±2.71）、（8.86±2.97）较CON组（5.23±0.54）明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.001），两组HbA1c水平（8.00±1.41）、（7.65±2.04）较CON组（4.32±0.42）亦明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.001）（见表1），从而说明血糖长期控制不良是引起糖尿病并发症的一个重要原因；同时高血糖状态下，AR活性增高，引起多元醇通路的激活,后者通过启动高渗应激、葡萄糖及脂质氧化应激、蛋白质的非酶糖基化单独或协同作用造成视网膜病变的发生、发展［8］。
本文资料选择病程5年内就出现糖尿病视网膜病变的患者，旨在利用该部分患者具有较强的遗传易感性，以便找出易感候选基因。AR是由位于第7号染色体长臂（7q35）的醛糖还原酶基因编码，该基因由10个外显子和9个内含子组成，全长约18?kb。国外大量研究报道其5′端启动子上游2.1?kb区存在AR基因多态性即(AC)n二核苷酸串联重复序列与糖尿病的微血管并发症密切相关。本研究选择山东地区人群作为研究对象，其中2型糖尿病患者74例，无糖尿病对照组40例。同样发现存在该微卫星多态，其中Z-2［(AC)23］等位基因在BDR组（28.2%）高于NDR组（8.6%）和CON组（10.0%），差异有统计学意义（χ2＝4.635和χ2＝4.255，P＜0.05）；Z+2 ［(AC)25］等位基因频率在BDR组（15.4%）低于NDR组（37.1%）和CON组（35.0%），差异有统计学意义（χ2＝4.576和χ2＝4.018，P＜0.05）。其余5种等位基因频率BDR组与NDR组和CON组差异无统计学意义（P＞0.05）。说明Z-2、Z+2等位基因可能与BDR的发生有关。携Z-2等位基因患者易产生BDR，提示该等位基因是山东地区人群DR发病的危险因子；Z+2等位基因者的相对危险度仅为0.31，提示该等位基因可能为山东地区人群BDR的保护性基因。
由此可见,高血糖、AR活性升高和多元醇积聚在糖尿病慢性微血管并发症的发生中起着非常重要的作用，如何阻止或延缓并发症的发生发展是糖尿病治疗的重点。目前,除了对糖尿病患者进行良好的血糖控制外,醛糖还原酶抑制剂的应用研究是今后防治工作的重点之一。近年来，对于AR基因在某些糖尿病慢性并发症的发生和发展中的重要性已得到公认，目前对AR基因的研究主要集中在5′调控区，但AR基因的3′端及此基因中长度相当于外显子十几倍的内含子也可能含有某些与AR活性增高相关的调控元件，对这些区域的研究是目前有待深入。
【参考文献】
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