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3讨论
转谷氨酰胺酶家族是一类能催化蛋白质谷氨酰胺残基与赖氨酸残基发生交联反应的钙依赖蛋白酶，包括角化细胞转谷氨酰胺酶、组织型转谷氨酰胺酶、表皮细胞转谷氨酰胺酶和凝血因子ⅩⅢa等[7]。组织型转谷氨酰胺酶即tTG是这个家族中分布最为广泛的成员，它在许多组织细胞的生理和病理过程中发挥多种功能，如参与细胞外基质的修饰、细胞粘附、细胞凋亡、细胞与细胞外基质的交互作用、信号转导等[8]。这些功能是通过催化纤维连接蛋白、玻连蛋白、层粘连蛋白和Ⅲ型胶原等发生共价交联，形成ε-（γ-谷氨酰）赖氨酸异肽键来实现的[7]，而研究表明这些蛋白恰好是构成PVR增生膜中ECM的主要成分[9]。由tTG催化形成的这种异肽键非常稳定，具有抗酶、化学和机械破坏的特性，能抵抗任何已知存在于脊椎动物体内的酶的作用[4]，所以胶原酶和其它基质降解酶均不能使之降解。我们在PVR视网膜前膜中检测到了tTG蛋白的表达。Priglinger等[10]在PVR增生膜中也检测到了tTG的活性，与我们的研究结果类似。而Raghunath等[11]采用免疫组化方法对正常成人视网膜组织进行的检测则未见tTG的阳性表达。这些提示我们tTG极可能与PVR的发病过程密切相关，也可能为PVR增生膜中基质降解酶的升高和ECM成分的持续累积之间的矛盾现象提供解释。我们检测到C级和D级PVR视网膜前膜中均有tTG蛋白的阳性表达，并且二者的表达阳性率没有差异，这说明tTG可能在PVR的不同临床阶段中均发挥作用。在PVR视网膜前膜的免疫组化染色切片中，我们发现tTG的阳性表达不仅存在于细胞外基质中，在一些成纤维细胞样细胞和巨噬细胞中也存在，这提示我们这些细胞可能是膜中tTG的来源之一。
RPE细胞作为PVR发病和增生膜形成过程中最为关键的细胞成分，是否能表达tTG蛋白？当它处于病理条件下时，表达水平是否会发生变化？为进一步解决这二个问题，我们检测了培养的人RPE中tTG的表达情况，并进行了半定量分析，发现未受到玻璃体液作用的RPE细胞即有tTG蛋白的表达，只是表达水平较低，当给予正常玻璃体液刺激时，表达水平没有明显变化，而给予PVR患者的玻璃体液刺激后，表达水平升高。因此，我们认为，培养的人RPE细胞能表达tTG蛋白，在PVR玻璃体液的作用下，表达水平增加。这提示我们PVR玻璃体液中可能含有刺激RPE细胞表达tTG的因素，而正常玻璃体液中没有这种因素或者含量较低。在PVR发病过程中，调控tTG表达的因素尚不清楚。研究表明，在培养的人RPE细胞、晶状体上皮细胞和小梁细胞中，转化生长因子β2（transforming growth factorβ2，TGF－β2）均能诱导tTG mRNA的合成[10,12,13]，而tTG则能促进TGF－β2由无活性形式向有活性转变，有活性的TGF－β2再以自分泌的方式进一步促进自身mRNA的合成[12]，由此形成一个恶性循环。在PVR患者的玻璃体液中，TGF－β2的活性增加[14]，我们的研究表明暴露于此环境中的RPE细胞表达tTG蛋白的水平也升高，因此我们推测：有活性TGF－β2的增加与tTG表达的增加可能互为因果。这种可能性进一步强调了tTG可能在PVR中扮演重要角色。
综上所述，PVR视网膜前膜和培养的人RPE细胞均表达tTG蛋白，PVR玻璃体液作用下的RPE细胞表达tTG的水平升高，这表明tTG参与了PVR的发病过程，并且在这个病理过程中，RPE细胞很可能具有合成tTG蛋白的能力，这种能力在细胞接触PVR患者的玻璃体液后被加强。本研究使我们对tTG与PVR的关系有了初步的了解，而对于tTG在PVR发病过程中发挥作用的确切机制、调控因素和对细胞因子的影响等还有待于进一步的研究。对tTG作用机制的深入研究和其特异性抑制剂的开发，可能会为我们临床防治PVR提供新的策略。
【参考文献】
1惠延年.眼科学.第6版. 北京:人民卫生出版社, 2004:166
2 Kon CH, Occleston NL, Charteris D, Daniels J, Aylward GW, Khaw PT. A prospective study of matrix metalloproteinases in proliferative vitreoretinopathy. Invest Ophthalmol Vis Sci ,1998;39:1524－1529
3 Hiscott PS, Grierson I, Mcleod D. Natural history of fibrocellular epiretinal membranes: a quantitative, autoradiographic, and immunohistochemical study. Br J Ophthalmol ,1985;69:810－823
4 Fesus L, Davies PJA, Piacentini M. Apoptosis－molecular mechanisms in programmed cell death. Eur J Cell Biol ,1991;56:170－177
5王琳,惠延年,王雨生,惠宏襄,王剑波.人视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏培养.中华眼底病杂志，1997; 13(3):157-159
6康军,崔志利,海欧,安洁,高丹宇.细胞因子及苏拉明对视网膜色素上皮细胞增殖的影响.国际眼科杂志,2005;5(4):655-658
7 Folk JE. Transglutaminases. Annu Rev Biochem ,1980;49:517-531
8 Gentile V, Thomazy V, Piacentini M, Fesus L, Davies PJ. Expression of tissue transglutaminase in BALB-C 3T3 fibroblasts: Effects on cellular morphology and adhesion. J Cell Biol ,1992;119:463-474
9冯学峰,惠延年.细胞外基质在增殖性玻璃体视网膜病变形成中的作用. 国外医学眼科学分册,1997;21 (6):348-353
10 Priglinger SG, May CA, Neubauer AS, Alge CS, Schonfeld CL, Kampik A, Welge-Lussen U. Tissue Transglutaminase as a Modifying Enzyme of the Extracellular Matrix in PVR Membranes. Invest Ophthalmol Vis Sci ,2003;44(1):355-364
11 Raghunath M, Cankay R, Kubitscheck U, Fauteck JD, Mayne R, Aeschlimann D, Schlotzer-Schrehardt U. Transglutaminase activity in the eye: cross－linking in epithelia and connective tissue structures. Invest Ophthalmol Vis Sci ,1999;40:2780-2787
12 Clement S, Velasco PT, Murthy SN, Wilson JH, Lukas TJ, Goldman RD, Lorand L. The intermediate filament protein, vimentin, in the lens is a target for cross－linking by transglutaminase. J Biol Chem ,1998;273:7604-7609
13 Welge-Lussen U, May CA, Lütjen-Drecoll E. Induction of tissue transglutaminase in the trabecular meshwork by TGF－β1 and TGF－β2. Invest Ophthalmol Vis Sci ,2000;41:2229-2238
14 Connor TB Jr, Roberts AB, Sporn MB, Danielpour D, Dart LL, Michels RG, de Bustros S, Enger C, Kato H, Lansing M. Correlation of fibrosis and transforming growth factor－beta type 2 levels in the eye. J Clin Invest ,1989;83(5):1661-1666 上一页 [1] [2] |
