摘要：目的  研究乌饭树树叶及其提取物对视网膜免受光损伤的保护功能。方法  将20只新西兰白兔分成4组：正常对照组和模型对照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。正常对照组动物自由摄取饲料，自由饮水；模型对照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组动物除自由摄取饲料，自由饮水外，每天分别喂乌饭树新鲜树叶[50g/(kg・d)]、乌饭树陈旧树叶[50g/(kg・d)] 和乌饭树树叶提取物[50mg/(kg.d)],连续4周。并且进行强光刺激，同时利用视网膜电图(ERG)进行视网膜分析，最后处死白兔测定视网膜中丙二醛(MDA) 的含量和总超氧化物岐化酶(TSOD)的活力。结果  ERG测定结果发现，对照组B波的潜伏期时间延长而振幅降低，模型组白兔ERG的变化趋势正好相反。同时模型组视网膜中的MDA含量要低于对照组(P<0.01)，而SOD含量则高于对照组(P<0.01)。结论  服用乌饭树树叶及其提取物对眼睛视网膜具有明显的保护作用。

　　关键词：乌饭树；提取物；视网膜；光损伤

　　The protective effect of Vaccinium Bracteatum Thunb leaves　and the extract against light injury of retina

　　Wang Li, Zhang Xuetong, Yao Huiyuan

　　(School of Food Science and Technology, Southern Yangtze University, Wuxi 214036;Department of Ophthalmology of the Wuxi No.4 Peoples Hospital, Wuxi 214036, China)

　　ABSTRACT: Objective  To investigate the protective effect of the extract of Vaccinium Bracteatum Thunb (VBT) leaves against light injury of retina. Methods  20 Newzealand rabbits were divided into 4 groups: the normal control group, modelⅠgroup, modelⅡ group, and model Ⅲ group. The normal control group ate and drank freely.  modelⅠgroup ate and drank freely but took in 50g/(kg・d) fresh VBT leaves daily for 4 weeks. model Ⅱgroup ate and drank freely, but took in 50g/(kg・d) old VBT leaves daily for 4 weeks. model Ⅲ group ate freely, but took in 50mg/(kg・d) extract of VBT leaves(resolved in water) daily for 4 weeks. All rabbits were exposed to strong light, meanwhile, the retinas were analyzed by electroretinogram (ERG) every week. Finally, all the rabbits were killed and the content of MDA and SOD in the retina were detected. Results  In the control group, the latency time of the B wave increased and the amplitude of the B wave shortened, while in the model Ⅰ,Ⅱ and Ⅲ groups, the changes of B wave just opposite. The content of MDA in the model Ⅰ,Ⅱ, and Ⅲ groups was lower than that in the control group(P<0.01), but the content of SOD in the model Ⅰ, Ⅱ, and Ⅲ groups was higher than that in the control group(P<0.01). Conclusion  The leaves of VBT and the extract can protect the retina against light injury.

　　KEY WORDS: Vaccinium Bracteatum Thunb(VBT); extract; retina; light injury

　　乌饭树是杜鹃花科的一种植物，我国南北各地均产，很多中药类书籍中都记载其对人体具有保健作用[12]。国外对乌饭树同种属植物的果实进行研究发现，其对多种眼科疾病均有很好的治疗效果，目前很多国家都已经把乌饭树紫黑浆果中提取出的色素类物质用于眼科医疗领域。意大利、法国、西班牙、韩国、美国以及新西兰等国家已经将其应用于夜盲症、毛细管脆弱、脑血管障碍、胃溃疡的治疗[34]。本研究采用强光刺激损伤白兔视网膜，同时喂食乌饭树树叶或其提取物，利用视网膜电图技术(electroretinogram, ERG)对白兔视网膜进行研究，然后对视网膜进行丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)含量分析，最后对其保护机理进行了初步的探讨。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  实验动物  新西兰大白兔20只，购自江南实验动物场，体重(2.5±0.5)kg。

　　1.1.2  药品与试剂  乌饭树树叶，购自于江苏溧阳；乌饭树树叶提取物，实验室自制；美多丽眼液，参天制药株氏会社(日)；倍诺喜眼液，参天制药株氏会社(日)；总蛋白含量测试盒，购自于南京建成生物研究所； MDA含量测定试剂盒，购自于南京建成生物研究所； SOD活力测定试剂盒，购自于南京建成生物研究所；PBS(磷酸盐缓冲液)：800mL蒸馏水中溶解8g氯化钠，0.2g氯化钾，1.44g磷酸氢二钠和0.24g磷酸二氢钾，用盐酸调节pH至7.4，加水定容至1L，在1.034×105Pa高压下杀菌20min，保存于室温。

　　1.1.3  主要仪器  全视野闪光刺激器，重庆医用电子仪器厂；视觉电生理检查与诊断系统VETSⅢB，重庆医用电子仪器厂。

　　1.2  方法  20只新西兰大白兔适应性喂养1周，自由摄取饲料，自由饮水。然后用1000W强光照射，刺激眼睛视网膜产生光损伤，同时按照不同的组别进行喂养食物，每周进行ERG的测量。具体分组如下：正常对照组：自由摄取饲料，自由饮水。模型对照Ⅰ组：自由摄取饲料，自由饮水，另外每天喂乌饭树新鲜树叶，按照50g/(kg・d)剂量喂养，连续4周。模型对照Ⅱ组：自由摄取资料，自由饮水，另外每天喂乌饭树陈树叶，按照50g/(kg・d)剂量喂养，连续4周。模型对照Ⅲ组：自由摄取饲料，另外每天喂乌饭树树叶提取物(溶解于饮水中)，按照50mg/(kg・d)剂量喂养，连续4周。

　　1.2.1  ERG的测量  记录电极为角膜式接触电极，参考电极和接地电极为普通电极。预先用剪刀剪去白兔额部毛，再用剃须刀刮干净。进行ERG测量操作前先用美多丽眼液对白兔进行扩瞳，暗适应30min，眼角膜用倍诺喜进行麻醉。分别利用蓝光、白光和红光对白兔视网膜进行刺激(在白光刺激后明适应30min再进行红光刺激测定)。记录电极置于兔子眼角膜表面，参考电极置于靠近兔子额部，用胶布固定，接地电极置于兔子耳朵上，用胶布固定。测量时，兔子头部置于刺激球中央，对单只眼睛视网膜进行刺激。刺激条件：高频85Hz，低频0.1Hz，刺激光亮度1.5Log，单次刺激。记录仪进行同步记录，经过仪器分析得到B波的延滞时间(以ms为单位)和振幅(以μV为单位)，进行分析。

　　1.2.2  视网膜匀浆的制备  于实验30d后将白兔处死，摘除眼球，仔细去除眼内容物，剥离视网膜，置于冰冷的玻璃匀浆器中，冰浴下碾磨5min，制成匀浆，10000r/min高速离心15min，取上清液待用。

　　1.2.3  总蛋白含量的测定  蛋白质上的氨基(-NH3+)与考马斯亮兰染料上的阴离子结合，能够使溶液从棕红色变为蓝色，通过测定吸光度值可以计算出其中的蛋白质含量。取组织匀浆50μL，按照试剂盒配制试剂，并且进行测量。

　　1.2.4  MDA的测定  过氧化脂质的分解产物-MDA与硫代巴比妥酸作用后形成红色物质，利用分光光度计测定吸光度，可以计算出其中的丙二醛含量。按照试剂盒配制试剂，并且进行测量。

　　1.2.5  总超氧化物岐化酶(TSOD)活力的测定  通过黄嘌呤以及黄嘌呤氧化酶反应体系产生超氧阴离子自由基[O-2・]，氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，当样品体系中含有SOD时，则对[O-2・]有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值要低于对照管的吸光度，通过计算可以得出视网膜中SOD的活力。按照试剂盒配制试剂并且测量。

　　2  结果

　　2.1  ERG测定结果  ERG分别由PⅠ、PⅡ和PⅢ三个导程构成，B波是ERG中属于其中的PⅡ导程部分，紧随A波后的一个正相波。它起源于光感受器与神经节细胞之间的神经通路中的一种光兴奋活动，可能来自双极细胞或Müller细胞。它反映视网膜内核层区域细胞的电活动，并且反应非常迅速，受外界因素的影响较为明显，如缺氧、温度变化以及不同的光刺激等，因此B波作为评价视网膜功能可靠而灵敏的客观指标之一，近年来越来越受到重视。在本研究中测定白兔在受强光刺激后暗视ERG、暗反应最大波和明视ERG中B波的变化。在实验中采用三种光(蓝光、白光、红光)对白兔视网膜进行刺激，其中蓝光测定值代表的是暗视ERG，白光测定值代表的是暗反应最大波，而红光测定值代表的是明视ERG。具体结果见表1-3。

　　2.2  白兔眼睛视网膜抗氧化指标的检测结果  实验30d后，将白兔的视网膜取出，进行适当的处理，测定其中的MDA和TSOD含量，前者可以反映视网膜脂质过氧化的程度，而后者则反映其中抗氧化酶体系活力的变化。具体结果见表4。

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