曲尼司特（tranilast，肉桂氨茴酸）为新的抗变态反应药物，可稳定肥大细胞和噬碱性细胞膜，阻止细胞裂解脱颗粒，从而抑制组胺、5羟色胺、白三烯和SRSA等过敏介质释放，目前，临床上主要用于过敏性哮喘、过敏性鼻炎和过敏性皮炎的治疗与预防［1］。20世纪70年代首先由日本学者Koda等［2］研制成功；国内由中国药科大学研制成功，且仅有口服制剂的生产与销售，尚无其滴眼剂（治疗过敏性结膜炎），为此我们开发了曲尼司特滴眼液，为控制其质量，在参考文献［3］的基础上，建立了测定曲尼司特滴眼液含量及有关物质的高效液相色谱法。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试药与试剂 曲尼司特对照品（纯度为100.5%，中国药科大学制药有限公司提供）；曲尼司特滴眼液（规格为5ml∶25mg，批号040512、040513和040514），甲醇色谱纯，磷酸二氢钾、无水乙醇为分析纯。
1.1.2 仪器 高效液相色谱仪（Waters600E泵控系统，WatersTM 486紫外检测器，Rheodge7125进样器，HW色谱工作站）。
1.2 色谱条件
色谱柱：江苏汉邦Lichrospher C18 (200mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.02mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至4.2)(60∶40)，流速为1.0 ml·min-1,检测波长333nm，进样量为20μl。
1.3 溶液的制备
1.3.1 标准曲线的制备 精密称取曲尼司特对照品约25mg，置50ml棕色容量瓶中，加乙醇适量使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml分别置10ml棕色容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，制成系列浓度的标准溶液，分别进样20μl，记录色谱图，以对照品溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
1.3.2 含量测定溶液的制备 精密量取曲尼司特滴眼液2ml，置10ml棕色容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml，置10ml棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液；精密称取曲尼司特对照品适量（约12.5mg），置25ml量瓶中，加乙醇适量使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml置25ml中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；取处方量辅料，用流动相配成不含主药的约相当于含曲尼司特0.1mg·ml-1的模拟处方溶液，振摇，过滤，取续滤液作为辅料供试溶液。
1.3.3 方法学有关溶液的制备 精密量取5ml曲尼司特滴眼液5份，分别置25ml容量瓶或烧杯中，依次按下列步骤作破坏试验：（1）加入1mol·L-１盐酸溶液１ml，于室温下放置片刻，以１mol·L-1氢氧化钠溶液回调至中性。（2）加入１mol·L-1氢氧化钠溶液１ ml，于室温下放置片刻，以１mol·L-１盐酸回调至中性。（3）置于小烧杯中，电炉直接加热蒸干，冷却，加25ml流动相稀释溶解。（4）加流动相稀释至刻度，摇匀，于强光4500LX条件下放置4h。（5）加30%过氧化氢2ml于室温下放置片刻，分别用流动相稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试液；称取本品处方量辅料适量，分别经酸、碱、光、 热、氧化破坏后同上法操作，取续滤液20μl进样。
1.3.4 有关物质试验溶液的制备 取“含量测定溶液的制备”项下贮备液作为供试品溶液，量取适量，加流动相制成每１ml含10μg的溶液作为预试溶液。
1.4 分析测定
1.4.1 含量测定 分别精密吸取对照品溶液与样品溶液20μl注入高效液相色谱仪，依上述色谱条件，以外标法计算含量，测定3批样品的标示百分含量（%）。
1.4.2 有关物质的测定 照色谱条件进行试验，取预试溶液20μl注入液相色谱仪进行预试，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰高达满量程的20 %～25 %，再精密量取供试液20μl进样，记录色谱图主成分保留时间的2倍， 按峰面积归一化法计算降解产物的量。采用本法测定3批样品有关物质的标示百分含量 (%)。
[1] [2] 下一页 |
