雷公藤内酯醇和环胞霉素A在体外对角膜上皮细胞HLA抗原表达的影响

　　中华微生物学和免疫学杂志 2000年第4期第20卷 基础免疫学

　　作者：赵岐　郦全福　刘业滋

　　单位：赵岐 郦全福（广州军区广州总医院）；刘业滋（广州南方医院）

　　引起角膜移植排斥反应的主要抗原是HLAⅡ类抗原，该抗原与T淋巴细胞产生γ-干扰素(IFN-γ)的作用有关。为观察免疫抑制剂雷公藤内酯醇(TL)和环胞霉素A(CSA)在体外对IFN-γ诱导的角膜上皮细胞HLA抗原表达的影响，用猝死的成人角膜上皮细胞分为A，B两组，A组测HLA-ABC抗原含量，B组测HLA-DR抗原含量。两组按试验需要分别加入IFN-γ(终浓度为500U/ml)，孵育24h后，再分别加入CSA(终浓度为300ng/ml)或TL(终浓度为100ng/ml)。另设阴性对照组及阳性对照组。将上述各组的上清液吸出，分别加入第一抗体(HLAⅠ抗体)50μl，阴性对照组加入等量的PBS，4℃ 30min。含1% BSA的PBS液冲洗后，加入FITC-标记二抗(羊抗小鼠)50μl(阴性对照组也加入50μl FITC-标记二抗)，4℃，30min。用ACAS-570粘附式激光扫描共焦显微细胞分析仪(美国Meridian Instrument)分析细胞表面抗原。将标记好的细胞标本置于ACAS-570粘附式激光扫描仪上，通过测定细胞表面HLA抗原的荧光强度来反映细胞抗原的相对含量，以平均荧光值计量。

　　结果显示：CSA组的HLA-DR抗原的平均荧光值为1035.0±38.6，阳性对照为1050.2±31.1，HLA-ABC抗原为1156±37.7，阳性对照为1159.1±31.1。CAS组与未加免疫抑制剂的对照相比，差异不显著(P＞0.05)。因此CSA在体外对IFN-γ诱导角膜上皮细胞HLA-DR和HLA-ABC抗原的表达无直接抑制作用。在TL组HLA-DR抗原的表达平均荧光强度为727.3±30.5，阳性对照为1050.2±31.1，HLA-ABC的平均荧光强度为744.2±39.7，对照组为1159.1±31.1。TL组与阳性对照组比较，HLA-ABC和HLA-DR抗原的表达量均明显减少，差异非常显著(P＜0.001)。表明TL在体外可直接抑制IFN-γ诱导上述二类抗原的表达。为TL的抗免疫排斥反应的机理提供了又一依据。推测其发生抑制的机理可能与其抑制细胞的DNA和RNA的合成，干扰细胞核苷运转体系，使HLA抗原蛋白的合成产生障碍有关。

　　(收稿日期：2000-01-03)