于丹 陈梦飞 葛坚
广州中山眼科中心 510060
目的:探索运用角膜基质细胞做为诱导环境,将小鼠多潜能干细胞诱导分化为角膜上皮细胞的可行性,拟在体外重建角膜上皮组织,为进一步组织工程化角膜上皮移植奠定实验基础,为角膜组织工程中种子细胞的来源开辟新的途径。
方法:表层角膜缘基质诱导分化,诱导后细胞的检测:运用分子生物学技术在RNA水平及蛋白水平上进行marker的检测及运用电镜观察其形态学的变化,进一步证明诱导后的细胞与诱导前多潜能干细胞的变化及与角膜上皮细胞的鉴定。
结果:共培养后的细胞进行RT-PCR检测,发现在RNA水平上可以表达角膜上皮特异性角蛋白K12,说明在特定的条件下,多潜能干细胞可以向角膜上皮定向分化。激光共聚焦显微镜技术检测到角膜上皮特异性markerK12的表达,进一步证明诱导后的细胞具有角膜上皮细胞特异性Marker.电镜观察诱导后细胞上皮细胞复层。
结论:利用细胞外基质诱导多潜能干细胞定向分化为角膜上皮细胞具有一定的可行性,结合特定的细胞因子可以协同促进角膜上皮细胞的分化,为进一步建立运用干细胞诱导分化为角膜上皮细胞奠定基础,同时为人工建立角膜奠定良好的基础。
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