杨燕宁   王芳   杨万举   褚煜   袁静   邢怡桥

武汉大学人民医院眼科中心   430061

目的：研究FAK信号通路在TNF-α上调角膜中明胶酶活性的作用。

方法：将体外培养的健康的人角膜上皮细胞随机分为4组（ABCD组）且各组细胞数目大致相同，用不同浓度的TNF-α干预ABC组，D组用等量PBS处理，Gelatin Zymography检测各组培养液中MMP-2、9的活性，Western blot 定量分析MMP-2，-9的蛋白表达及FAK的表达；运用siRNA技术特异性抑制人角膜上皮细胞FAK的表达后，再次用Gelatin Zymography检测MMP-2、9的活性，Western blot 定量分析MMP-2，-9的蛋白表达及FAK的蛋白表达。

结果：与对照组相比，3种不同浓度（1、10、100 ng.mL-1）TNF-α干预组中角膜上皮细胞分泌的MMP-2、9的活性均明显上调(P<0.001)，并呈一定的剂量依赖性；Western blot 定量分析MMP-2，-9的蛋白表达，与对照组相比，3种不同浓度TNF-α干预组中角膜上皮细胞分泌的MMP-2、9蛋白量及FAK蛋白量显著增加(P<0.001)。运用siRNA技术特异性抑制人角膜上皮细胞FAK的表达后，3种不同浓度TNF-α干预组MMP-2、9的活性均较各组抑制前下调(P<0.05)，MMP-2、9蛋白量及FAK蛋白量也较抑制前减少(P<0.05)。

结论：炎性因子TNF-α可刺激角膜上皮细胞中MMP-2、9的表达；FAK信号转导通路参与了上述过程；特异性阻断FAK信号通路能使角膜中明胶酶（MMP-2，-9）活性下调。