【摘要】 目的：了解奥曲肽对体外培养黑色素瘤细胞株A375的影响。方法：体外培养扩增A375细胞，分别与浓度为5，1，0.2，0mg/L的奥曲肽共培养24，48，72h，利用MTT法测定各组奥曲酞对A375细胞增殖作用的影响，通过ELISA法测定奥曲酞对A375细胞分泌VEGF作用的影响。结果：共培养24h后，奥曲酞对A375细胞增殖有显著促进作用(F=14.180，P=0.00)， 48h及72h增殖作用不明显;奥曲酞浓度及作用时间对体外培养的A375细胞分泌的VEGF含量有显著性影响(浓度因素：F=24.441，P=0.00;时间因素：F=127.233，P=0.00)，各浓度的奥曲酞与A375细胞共培养后24h均呈现明显的增加细胞分泌VEGF的作用，浓度越高增加的越少(单向方差分析F=19.489，P=0.00);随着作用时间的延长，细胞分泌VEGF减少， 72h各浓度的奥曲酞均明显抑制A375细胞分泌VEGF，浓度越高抑制作用越明显(单向方差分析F=16.116，P=0.002)。结论：奥曲肽对黑色素瘤细胞A375分泌VEGF长期的趋势上是抑制作用，与时间和剂量呈依赖关系。
【关键词】 生长抑素;黑色素瘤;血管内皮生长因子;抑制作用
Research of the effect of octreotide on cultured A375 melanoma cell lines GuiQin Liu,FangWei YingFoundation item: Shenzhen Science and Technology Plan Project, China (No.200702088)，Shenzhen Eye Hospital, Shenzhen 518040, Guangdong Province, ChinaAbstractAIM: To understand effects of octreotide on vascular endothelial growth factor (VEGF) secretion in cultured A375 melanoma cells.
METHODS: A375 cells in vitro amplificated were cocultured with octreotide of concentration 5,1 and 0.2mg/L for 24,48 and 72 hours.Whether octreotide affected the proliferation of A375 melanoma cells was tested by MTT methods. The octreotide effects on VEGF secretion in A375 cells were tested according to the ELISA method, and octreotide effects on cultured A375 melanoma cell line proliferation and VEGF secretion were statistically analyzed.RESULTS: Twentyfour hours after coculture, octreotide improved the A375 cell proliferation (F=14.180，P=0.00). The concentration and time of octreotide coculture with A375 cells in vitro affected the VEGF secretion significantly (content factor：F=24.441，P=0.00;time factor：F=127.233，P=0.00).Octreotide of the three concentrations improved VEGF secretion in A375 cells in 24 hours.The higher concentration, the less in crease of VEGF level(Oneway analysis of variance:F=19.489，P=0.00),and octreotide decreased VEGF secretion in A375 cells in 72hour,the inhibiting power accorded with the concentration(Oneway analysis of variance:F=16.116，P=0.002).CONCLUSION: Octreotide inhibition on VEGF secretion in A375 melanoma cells is a longterm trend and in a dosedependent manner.
KEYWORDS: octreotide; melanoma; vascular endothelial growth factor; inhibition0 引言
黑色素瘤组织中有大量的肿瘤血管，对肿瘤的生长有重要的作用，生长抑素对神经内分泌肿瘤等肿瘤血管具有一定的生成抑制作用，研究初步阐述生长抑素奥曲肽对体外培养的黑色素瘤细胞株A375分泌血管内皮生长因子(VEGF)作用的影响。
1 材料和方法
1.1 材料
A375细胞株(中科院上海生物研究所提供利用含150mL/L胎牛血清的DMEM完全培养基培养并扩增)，DMEM培养基(GIBCO)，胎牛血清(杭州四季青)，奥曲酞(山东中天)，酶标仪(THAM)。
1.2 方法
1.2.1 奥曲酞对A375细胞增殖作用的测定
取处于对数生长期的A375细胞，800r/min离心5min，弃上清，加入DMEM完全培养液，调整细胞密度至109/L,各取200μL细胞悬液加入到96孔培养板，按照分组在各孔中加入奥曲酞，浓度分别为0(对照组)，5，1，0.2mg/L，每组5个复孔。将培养板置于37℃，50mL/L CO2培养箱培养24，48，72h后每孔加入5g/L MTT液20μL，继续培养4h后，吸除培养液，加入二甲基亚砜200μL，充分混匀，在酶标仪上测定每孔的吸光度A值，波长为492nm。表1 奥曲酞对A375细胞增殖作用(略)
1.2.2 奥曲酞对A375细胞分泌VEGF作用的测定
制备检测样品：109/L A375细胞悬液各取200μL加入96孔培养板，分别加入奥曲酞浓度分别为0(对照组)，5，1，0.2mg/L，每组5个复孔，置于37℃，50mL/L CO2培养箱培养24h后，吸出培养液上清。在酶标板上分别设定空白孔，含1000～15.6ng/L VEGF的倍比稀释共7个标准样品孔，及培养24h后的对照组样品孔，3组不同奥曲浓度的样品孔，各加入相应的样品溶液100μL，37℃反应120min后，弃去液体并在每孔加入检测溶液A 100μL，37℃反应60min，之后洗板3次，每次2min，甩干后每孔加入100μL检测溶液B，37℃反应60min，再次洗板5次，每次2min，甩干后依序每孔加入底物溶液90μL，37℃避光反应20min后加入终止溶液50μL终止反应，用酶标仪在450nm测量A值。按照倍比稀释的7个标准品的VEGF浓度为横坐标，A值为纵坐标绘出标准曲线，并用直线回归方程式，根据前样品的A值计算出样品的VEGF浓度。
统计学分析：利用SPSS 13.0系统处理数据。P<0.05为差异有统计学意义。
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