李慧 王方 顾青 陈之轩
上海交通大学附属第一人民医院眼科 上海同济大学附属第十人民医院眼科 200080
目的:snail超家族是触发一些肿瘤及纤维化疾病发病过程中上皮细胞向间充质细胞转换的关键转录因子。本研究调查视网膜色素上皮(RPE)细胞转化中snail基因表达的变化,探讨增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的发病机制。
方法:人视网膜色素上皮细胞系CRL2302。收集B、D级PVR临床患者玻璃体样本,分别以10%浓度玻璃体液诱导RPE细胞建立体外PVR模型(对应B、D两组),正常培养的RPE细胞作为对照(C组)。逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR、蛋白质印记和免疫细胞化学技术分别检测3组RPE细胞中snail在0h,4h,8h,16h,24h,48h的表达变化,同时观察上皮和间质细胞标志物的变化。统计学处理应用单因素方差分析和配对t检验。
结果:人视网膜色素上皮细胞CRL2302不表达内源性snail,与对照组相比,B、D组CRL2302细胞从上皮样形态转变为成纤维细胞的形态,D组较B组明显;B、D两组早在4h就检测到snail mRNA及蛋白表达,且高表达持续至24h,48h snail表达回落;定量分析显示D级玻璃体液诱导的RPE细胞中snail表达高于B级玻璃体液;上皮细胞标志E-钙粘素和闭锁小带-1表达下调甚至消失,间质细胞标志纤维粘连蛋白和α-肌动蛋表达呈现阳性。
结论:研究证实,snail基因参与并调控增生性玻璃体视网膜病变进程中视网膜色素上皮细胞向间充质细胞的转换。 |