Expression of Robo4 in the fibrovascular membranes from patients with proliferative diabetic retinopathy and its role in RF/6A and RPE cells

　　黄旅珍 于文贞 黎晓新 徐永胜

　　北京大学人民医院 100044

　　目的：Robo4，神经导向分子受体Robo家族的成员之一，在血管发育和新生血管形成中具有一定的作用。本研究探讨Robo4在糖尿病视网膜病变患者纤维血管膜(FVM)中的表达及在RF/6A 和RPE细胞中的作用。

　　方法：应用RT-PCR和免疫组化方法检测Robo4在FVM中的表达及定位。通过siRNA干扰技术沉默Robo4基因在RF/6A 和RPE细胞中的表达，并观察其作用。采用MTT法，Boyden小室法，细胞免疫组化和流式细胞仪对细胞的增殖，迁移，伸展和细胞周期及凋亡进行检测。用Matrigel胶对RF/6A管道形成能力进行检测。

　　结果：免疫组化结果显示Robo4高表达于纤维血管增殖膜中，在血管内皮细胞中与CD31共染，在纤维样组织中胶质细胞表达，与GFAP共染。Robo4基因沉默后可抑制RF/6A和RPE细胞的增殖和迁移及RF/6A的管道形成能力。细胞在缺氧的条件下较正常对照组凋亡明显增加。

　　结论：Robo4在纤维血管膜形成过程中具有一定的作用。Robo4基因沉默抑制了RF/6A和RPE细胞的增殖，并降低了这两种细胞对缺氧的耐受性。