马伟 罗燕 袁玲 胡旭颋 李建桥 肖伟 唐仕波

　　中山大学中山眼科中心 510060

　　目的：探讨三种不同体外培养方法所获新生SD大鼠视网膜光感受器细胞的纯度。

　　方法：取出生后4~5天 的SD大鼠视网膜，用胰酶消化分离获取细胞悬液，分别应用以下三种培养方法：传统培养法、无血清培养法和免疫抗体包被筛选法(immunopanning)，来培养视网膜光感受器细胞。传统培养法使用含10%FBS的DMEM/F12培养液进行培养，24小时后加入阿糖胞苷抑制胶质细胞的生长;无血清培养法，获取细胞悬液后使用无血清神经原培养基(Neurobasal A)和添加剂B27进行培养;免疫抗体包被筛选法，分别使用抗巨噬细胞(anti-macrophage)和抗视觉抑制蛋白抗体(anti-visual arrestin)包被培养瓶，将细胞悬液先后在包被后培养瓶中孵育30分钟，对筛选过的细胞进行体外培养，观察细胞形态及轴突生长情况。培养至第5天，用抗视杆细胞特异性视紫质蛋白(rhodopsin)抗体、抗视觉抑制蛋白抗体、NSE及GFAP，行免疫细胞化学鉴定并计算光感受器细胞纯度。

　　结果：新生SD大鼠视网膜神经元传统培养法中，视网膜神经元约80%左右，光感受器细胞占40%，剩余约20%为胶质细胞;无血清培养法可以获取95%左右的神经元细胞，其中约40%为视网膜光感受器细胞;而免疫抗体包被筛选法获取纯度达90%的光感受器细胞。

　　结论：免疫抗体包被筛选法可以获取纯度较高的视网膜光感受器细胞，为研究视网膜光感受器细胞提供理想的体外实验模型。