林浩添 张振平 晏丕松 汪琪璘
中山大学中山眼科中心 眼科学国家重点实验室 510060
目的:本文检测HBRBCs中APOBEC3家族的表达情况,为防止HIV等病毒破坏血-视网膜屏障提供有效策略。
方法:对3种HBRBCs进行总RNA的提取,cDNA第一链的合成,设计APOBEC3A-G引物对,分别使用RT-PCR和real-time-PCR对APOBEC3A-G基因进行检测;采用了抗APOBEC3G和APOBEC3F的兔多克隆抗体,通过Western blot对3种细胞、神经上皮层、色素上皮层和全层视网膜组织中的APOBEC3G和APOBEC3F蛋白表达水平进行检测。
结果:所有的HBRBCs中都有很强的APOBEC3B,APOBEC3C,APOBEC3F和APOBEC3G的mRNA表达,但没有APOBE3A和APOBEC3D的mRNA表达。所有的HBRBCs细胞中均有APOBEC3G和APOBEC3F(~46 kDa)的强烈蛋白表达。神经上皮层、色素上皮层和全层视网膜组织中APOBEC3G和APOBEC3F蛋白也有表达,水平比HBRBCs高,而且色素上皮层检验到的信号比其它的组织层都高。
结论:HBRBCs中只有部分APOBEC3基因家族成员被检测到,而且APOBEC3蛋白表达水平在新鲜的视网膜组织中要比在长期培养的细胞中高;进一步探明IFN-APOBEC3G信号通路可为防止HIV-1等病毒破坏血-视网膜屏障并彻底清除病毒储存库提供有效策略。 |