刘爱华 张红 孙靖 袁佳琴

　　天津医科大学眼科中心 300070

　　目的：探讨VEGF小片段干扰性RNA(siRNA)对猴视网膜微血管内皮细胞VEGF表达的影响。

　　方法：构建VEGFsiRNA重组质粒。将体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞分成常氧组和二氯化钴缺氧组。缺氧组中，脂质体LipofectamineTM2000(LFZ000)介导分别转染空载体质粒(空载体组)和VEGFsiRNA 表达质粒(VEGFsiRNA转染组)，缺氧组中未转染的细胞为缺氧对照组。常氧组细胞不做转染，为正常组。采用MTT法观察细胞增殖，real-time RT-PCR观察VEGFmRNA的表达，Western blot检测VEGF蛋白的表达。

　　结果：成功构建VEGFsiRNA重组质粒。MTT法细胞转染48h、72h、96h生长曲线显示VEGFsiRNA质粒转染组细胞的生长速度较其他各组细胞生长速度减慢。细胞转染24h后，细胞VEGFmRNA及蛋白表达水平显示：正常组细胞仅见弱的VEGFmRNA和蛋白表达，而缺氧组表达明显上调(P<0.01)，空载体转染组表达与缺氧组比较无显著性差异(P)0.05)，VEGFsiRNA转染组较缺氧对照组减弱(P<0.01)，VEGFmRNA和蛋白抑制率分别为48.07%、51.82%。

　　结论：VEGFsiRNA能有效抑制猴视网膜微血管内皮细胞VEGF表达。