马嘉 陈晓明 刘旭阳 蔡素萍 袁援生 曹桂群 闫乃红 余文瀚 王云 彭玉豪

　　四川大学华西医院眼科中心/眼科学研究室·韦素眼科研究所 昆明医学院第一附属医院眼科 美国爱尔康制药公司研究院青光眼组 610041

　　目的：探讨C型利钠肽(C-Type Natriuretic Peptide，CNP)对兴奋性氨基酸所致大鼠视网膜神经节细胞(RGC)神经兴奋毒性的保护作用。

　　方法：1)N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801或CNP预处理大鼠RGC 30min，谷氨酸孵育3天，免疫组化标记Thy-1，计数阳性存活细胞;2)成年S-D大鼠玻璃体腔分别注射5μl的NMDA、CNP、PBS或NMDA+CNP并分组，注射后6h、12h、18h、24h、4d、7d和14d处死并摘除眼球：①全视网膜平铺片，焦油紫染色计数RGC层存活细胞，TUNEL法计数凋亡细胞;②眼球石蜡包埋矢状切片，测定内丛状层厚度;3)注射后6h、24h、4d摘除眼球剥离视网膜，用RT-PCR及免疫印记法分别检测视网膜组织利钠肽B型受体、Calpain-μ，iNOS和bcl-xl/bax的mRNA和蛋白表达水平。

　　结果：1)细胞实验表明，100μM谷氨酸处理3天，RGC可存活50-70%，MK-801完全阻断其毒性作用(P<0.05)，5nM CNP可部分抑制、而50nM CNP可显著抑制细胞凋亡(P<0.05);2)动物实验表明，10μg CNP显著减少4mM NMDA毒性所产生的视网膜内层凋亡细胞(P<0.05)，增加存活细胞(P<0.05)，减轻内丛状层变薄(P<0.05);显著改善NMDA所致Calpain-μ、bcl-xl/bax升高(P<0.05)，而B型受体及iNOS无变化(P>0.05);24h可观察到 CNP神经保护作用，4d达高峰，持续至14d。

　　结论：CNP对兴奋性氨基酸所致RGC毒性有保护作用，其机制可能与降低Ca2+超负荷级联反应有关。