(4)红细胞免疫功能检测:红细胞具有识别和储存抗原的能力,并可通过免疫粘附作用清除循环免疫复合物。
红细胞免疫黏附试验:将2%人红细胞悬液与2%绵羊红细胞悬液混合,室温下孵育20分钟,镜检算出与绵羊红细胞形成玫瑰花环的百分率。
红细胞C3b受体花环试验:将用生理盐水洗涤3次的1.25×107/ml红细胞悬液与被C3b致敏的1×108/ml酵母菌液混匀、37~C水浴30分钟,固定、涂片、染色、镜检,算出花环率。正常人为12.8±5.35%。葡萄膜炎炎症期的红细胞C3b受体花环率明显下降。
红细胞免疫复合物花环试验:将未洗涤的1.25×107/ml红细胞悬液与非致敏酵母菌悬液(1×108/m1)混匀,水浴30分钟涂片计算花环率。笔者检测的87例献血员,红细胞免疫复合物花环率平均值为5.20±1.15%。蚕蚀性角膜溃疡患者比值常升高。葡萄膜炎炎症期血中免疫复合物明显增加。
(5)单克隆抗体临床应用:近年来已有多种单克隆抗体用于角膜病的诊断,其优点在于快速、准确、特异性高。如单疱病毒单克隆抗体可用于单疱角膜炎的快速诊断。T细胞亚群单克隆抗体用于T细胞亚群细胞计数,指导角膜移植。角膜蛋白单克隆抗体可检查恶性肿瘤。
4.分子生物学检测
(1)原位杂交技术:原位杂交技术是利用标记的DNA或RNA为探针,在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同,原位杂交可分为DNA—DNA杂交,DNA=RNA杂交。又根据探针的标记物是否能直接被检测,可分为直接和间接原位杂交法。前者主要用某些酶、同位素、荧光等标记的探针与靶核酸进行杂交,杂交后分别通过酶促反应、放射自显影、荧光显微镜等直接显示和观察。后者则一般采用半抗原标记探针,最终通过放免组织化学法对半抗原定位,间接地显示探针靶核酸形成的杂交体。
杂交反应时应注意载玻片加热、探针加热、杂交时间、杂交温度等;杂交后还应注意去除未参与杂交体形成的过剩的探针,除去探针与组织标本之间的非特异性结合,以减低背景,增加倍/噪比。处理时使用盐溶液的浓度、温度、洗涤时间等应根据核酸探针的类型和标记物的种类不同而不同,一般原则是盐溶液浓度由高蓼胝,而温度则由低到高。原位杂交技术主要用于单疱病毒性角膜炎、角膜变性、角膜营养不良、视网膜色素变性、视网膜母细胞瘤、急性前葡萄膜炎的辅助诊断和机理研究。
(2)聚合酶链反应:聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)是一种体外核酸扩增系统,是一个在模板DNA、引物和四种脱氧核苷酸等存在情况下,DNA聚合酶依赖的酶促合成反应。本法具有快速(数小时)、灵敏(ng甚至坛级的靶DNA)、操作简便(自动化)等优点。
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