PCR的基本原理是利用DNA聚合酶具有以单链DNA为模板，寡聚核酸为引物，沿5-_3方向掺人单核苷酸的特性，在体外适宜条件下扩增DNA片段。扩增过程包括高温变性、低温退火和适温延伸。在短时间内可使被检测的微量DNA扩增到数百倍，易于被检出。

       目前已广泛应用于眼科基础和临床研究，如沙眼、单疱性角膜炎、sjogren综合征、视网膜色素变性等的特异诊断。近年来，有学者利用PCR技术证实了培养的角膜内皮细胞能产生表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)受体的mRNA、成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor，FGF)和p-肌幼蛋白(Beta actin)mRNA。发现在老化细胞中EGF、mRN~．，白介素IJa(IL-La)mRNA及转化细胞生长f；．RNA减少，这可能是导致细胞转化的原因。Rakoczy等报道了应用PCR技术进行角膜HLA配型，通过选择I-ILA适配型可减少术后角膜移植排斥反应的发生。

    (3)反义核苷酸：反义核苷酸是根据互补原理，利用人工合成(或生物合成)一类特定互补的DNA或RNA片(或其修饰物)，当互补片段处理mRNA或DNA时，互补碱基间发生氢链作用形成互补双链，从而抑制mRNA翻蛋白的过程，表现为对基因表达的封闭和抑制。

        反义核苷酸特异性高，主要针对遗传突变基因或病毒的特异基因合成相应的反义DNA或RNA片段；加入体内能特异地封闭突变基因或病毒特异基因。

       反义核苷酸在眼科疾病的应用主要集中在病毒性疾病的基因治疗上，用反义核苷酸可杀灭病毒，治愈疾病。故有研究复发性单疱病毒性角膜炎的实验报告，Kimura等在小鼠单疱病毒角膜炎(HSK)模型上，利用反义核苷酸治疗，使HSK明显抑制，角膜单疱病毒(HSV)阳性细胞明显减少。

    (4)DNA序列测定：DNA的序列测定是分析基因的结构和功能的重要技术。其对眼免疫遗传病的诊断和治疗具有重要的意义。

        目前应用的快速序列测定法有两种：①Sanger双脱氧终止法(酶法)；②化学降解法  (Maxam—Gibert法)。Sanger双脱氧终止法简便快捷，应用广泛。其原理是利用特异性引物与单链DNA模板相退火，在DNA聚合酶作用下进行延伸反应，并在双脱氧核苷三磷酸作用下进行碱基特异性的链终止，然后采用聚丙烯酰胺凝胶电泳区分长度相差一个核苷酸的单链DNA，从而完成测序反应。利用放射自显影技术正确读取DNA序列。

    (5)克隆化基因的表达与蛋白产物的检测：目前对原核表达系统了解的比较深入，且应用广泛。原核生物的基因表达是以操纵子为单位，一个操纵子包括操纵基因和启动子。原核生物无核膜，其转录和翻译是同时进行的。原核基因不含内含子，故真核基因进入原核细胞表达时必须是已切除内含子的DNA片段。原核基因的控制主要有起始和终止控制(即启动子和衰减子控制)。大肠杆菌mRNA可以和多个核糖体结合。

      利用上述特点，可以对外源基因的蛋白进行表达，主要通过融合和非融合两种方式。对外源基因进行诱导表达，然后采用异丙基硫代．J3一D．半乳糖苷(IPTG)法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术、Western印迹法等以诱导和检测表达蛋白。

        眼科某些免疫缺陷病、免疫遗传病等均可采用克隆化基因的表达与蛋白的产物的检测进行研究，以从基因工程角度探讨和控制疾病的发生、发展。

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