摘 要 目的：观察一氧化氮(NO)含量含量在葡萄膜炎房水及玻璃体中的变化及L-硝基精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME)的治疗效果。方法：采用兔眼玻璃体内注射内毒素脂多糖(LPS)制备葡萄膜炎模型，以检测房水蛋白浓度、细胞数目和组织病理观察判定炎症程度，同时检测房水及玻璃体中NO的变化，考察 l-NAME在不同时期使用的疗效。结果：葡萄膜炎房水及玻璃体中NO含量显著增高；即刻使用L-NAME，显著降低了NO水平，同时其蛋白浓度、细胞数目及组织炎症程度明显降低；6 h使用L-NAME，则NO浓度下降不显著，蛋白浓度、细胞数目及组织炎症程度没有明显改善。结论：NO参与了葡萄膜炎的病理过程，即刻使用L-NAME可抑制实验性葡萄膜炎的发展。
关键词：葡萄膜炎,实验性；L-硝基精氨酸甲酯；一氧化氮
葡萄膜炎是一种常见的眼科疾病，具体发病机制尚不完全明确。一氧化氮( NO )是重要的生物信号分子和效应分子，在体内广泛参与各种生理病理过程，如调节血管张力，参与神经传递，介导炎症反应和免疫反应等［1］。研究NO在葡萄膜炎中的作用对了解葡萄膜炎的发病机制和寻求新的治疗途径具有重要意义。本实验检测了内毒素脂多糖（LPS）介导的兔眼葡萄膜炎模型房水及玻璃体中NO的改变，并观察了使用结构型一氧化氮合酶（constitutive nitric oxide synthase,cNOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)对葡萄膜炎的影响。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 色素兔 24只 48眼，雌雄不论，体质量（2.5±0.5） kg，第二军医大学实验动物中心提供，随机分 4 组，每组 6只12 眼。
1.1.2 主要药剂 (1)无致热源生理盐水 (上海长征医院制剂室),(2) LPS ( Salmonella Typhimurium菌株, Sigma公司), (3) L-NAME（Sigma公司），(4)一氧化氮酶法试剂盒（南京建成生物技术公司）。
1.2 实验方法
1.2.1 动物模型的建立及治疗 葡萄膜炎组以氯胺酮 30 mg/kg兔耳缘静脉注射麻醉，由睫状体平坦部向玻璃体注射含 10 ng LPS的生理盐水 20 μl；正常对照组注射相同容量的生理盐水；即刻(0 h)治疗组在玻璃体注射的同时耳缘静脉注射200 mg/kg的 L-NAME，6 h治疗组在玻璃体注射后 6 h耳缘静脉注射200 mg/kg的L-NAME。
1.2.2 样本的留取及检测 术后24 h处死动物，每组 6只取一侧眼球抽去房水约0.2 ml后，即取1 μl房水均匀涂布在载玻片上，空心干燥后行Wright染色；然后摘除眼球，去除眼前节，吸取玻璃体约1 ml ,剪除表面的视网膜组织。房水及玻璃体3 000 r/min离心后取上清液待测，对侧眼球完整摘除，浸泡于4%中性甲醛液中。
1.2.3 房水内细胞计数 载玻片分别由两个熟练的检验人员显微镜下计数，结果取其平均值。
1.2.4 房水蛋白浓度 正常对照组取房水10 μl,其余组取 1 μl ,分别稀释5倍和 50倍至 50 μl ,采用考马斯亮蓝比色法，按试剂盒说明步骤操作。
1.2.5 房水及玻璃体内NO含量测定 取房水0.05 ml加入双蒸水0.05 ml稀释至 0.1 ml，玻璃体取上清0.1 ml，以NO的最终代谢产物NO2－/NO3－的浓度代表NO水平，按NO（硝酸酶还原法）试剂盒说明书步骤进行。
1.2.6 组织病理检查 眼球火棉胶包埋，制通过视神经的矢状面切片，苏木精-伊红(H-E)染色，光镜检查，组织炎症程度按Tilton等［2］文献的标准分级。
1.3 统计学处理 采用 EXCEL软件，计量资料结果采用方差分析，等级资料采用秩和检验，组间比较为葡萄膜炎与正常对照组比较，各治疗组与葡萄膜炎组相比较。
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