眼科研究 2000年第3期第18卷 实验研究
作者：庞广仁 丁行振 邓新国 韩秀娴 田小莉 郭慧丽 靳伟民 李建新
单位：450003 郑州，河南省眼科研究所
关键词：氧化应力；一氧化氮；一氧化氮合酶；抗氧化剂
摘要 目的 探讨氧化应力、5种抗白内障药物对晶状体一氧化氮合酶（NOS）活性及一氧化氮（NO）水平的影响。方法 建立晶状体温育模型：培养液分7组：(1)对照组含DMEM10ml；（2）～（7）组含DMEM10ml外尚有30％H2O20.2ml，FeCL32mg，并于（3）～（7）组中分别加入海珠神、麝珠明目、益视安、晶福及视明露滴眼液各1.0ml，晶状体制备匀浆上清，测NOS，NO，MDA。结果 1．正常人、兔、SD鼠晶状体的NOS活性分别为(6.45±1.57）、(18.03±8.20）、(13.61±2.13）U／mgpro．，人、兔晶状体内均测不出NO，而SD鼠NO为(52.79±20.79）μmol／mgpro．。2．氧自由基诱导温育晶状体NOS活性上升1.5倍（P＜0.001），但晶状体内测不出NO。3．抗白内障药物影响NOS活性及NO水平，海珠神、麝珠明目、益视安及晶福组与氧化组相比显示抑制NOS活性，分别下降15％，9％，6％及5.5％，而视明露组诱导NOS活性上升41％（P＜0.001）。4．氧化组晶状体MDA上升2.15倍，各抗白内障药物组MDA下降至对照组以下，证明5种抗白内障药物都是抗氧化剂。结论 氧自由基诱导晶状体NOS活性上升，NO测不出。NO与白内障是否有关尚待深入研究。
分类号 R776
The effect of oxidative stress on nitric oxide and nitric oxide synthase activity in lens
Pang Guangren，Ding Xingzhen，Deng Xinguo
（Henan Institute of Ophthalmology，Zhengzhou 450003）
Abstract Objective To investigate the effect of oxidative stress on the nitric oxide synthase（NOS） activity and the nitric oxide（NO） level in lens by using organ-culture lens model．Methods In organ-culture experiments of lens，the lenses of SD rats were put into CO2 incubator．The culture fluid was divided into 7 groups：（1）the culture fluid of the control group containing 10－ml DMEM；（2）～（7）the culture fiuid of the oxidative group containing 30％H2O2（0．2ml） and FeCL3（2mg） in 10ml DMEM．Results （1）The NOS activity in lens of normal human，rabbit and SD was (6.45±1.57），(18.03±8.20) and (13.61±2.13） U／mg protein，respectively．The NO in lens rabbit can be tested，about 126.65±67.12，but the NO in lens of SD rat was (52.79±20.79）μmol／mg protein；（2）The oxidative stress NOS activity and NO level in lens，the NOS activity of the oxidative group and the control group was (126.10±8.07)U／mg and (82.56±24.99) U／mg protein，respectively （P＜0.001），but the NO level can not be tested in the oxidative group；（3）MDA was increased 2.15 times in the oxidative group．Conclusions The NOS activity of oxygen free radical-induced lens is increased and NO can not be tested．It need study further whether NO is related to cataract or not．
Key words oxidative stress nitric oxide nitric oxide synthase antioxidant
一氧化氮(nitric oxide，NO)是无机小分子气体，分子中含有未配对电子，属自由基结构，高度活跃，半衰期短，极不稳定，易与氧、超氧阴离子、过渡金属离子（Fe2＋，Cu2＋，Co2＋）反应而失活。NO易溶于水和脂肪，可在细胞内外自由弥散。
NO与眼病的研究国外始于1993年，比其它学科起步晚。NO与葡萄膜炎［1，2］，NO与青光眼［3，10］，NO与糖尿病视网膜病变等均有文献报道［4］。Kurenni 1995年报道用NADPH-硫辛酰胺脱氢酶及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的组化和细胞免疫法，发现眼内组织存在NOS。如视网膜外层、锥、杆细胞内节的椭圆体、外核层的光感受器附近、M%26uuml;ller细胞远突、双极细胞等处NADPH-硫辛酰胺脱氢酶活性较高；光感受器内节、少数内核层细胞、神经节细胞次之；而内外丛状层、色素上皮层和视神经等处活性较低。又发现脊椎动物的小梁网、睫状体、脉络膜、视网膜都有NOS的分布，并证实人的视网膜、葡萄膜、睫状肌和房水通道中同样有NOS的分布［5～9］。由于国内外均未见晶状体NOS的分布资料，本文在探讨晶状体NOS活性分布的同时，利用晶状体培养在氧化应力条件下模拟氧化损伤的体外模型，探讨NOS，NO是否促进或抑制白内障的形成及可能机理。
1 材料与方法
SD大鼠、纯种新西兰家兔购于河南医科大学实验动物中心，人眼球来源多数是创伤休克死亡者，死后6～24h取出眼球－80℃保存。试剂盒购于北京军事医学科学院、南京聚力生物工程公司。
晶状体、视网膜、玻璃体、脉络膜匀浆的制备 白兔空气栓塞致死，立刻摘出眼球，冰浴下解剖眼球，小心分离晶状体、玻璃体、视网膜、脉络膜样品，将样品置入pH7.4的PBS缓冲液内，冰浴下在匀浆器或超声振荡粉碎器内制备匀浆，10000r／min离心10min，取上清液测定NOS，NO，MDA。
晶状体器官培养方法 选体重120g±5gSD大鼠，剪头活杀，冰浴摘出眼球。1%庆大霉素灭菌后在无菌条件下剥离晶状体，浸浴在DMEM营养液内，在37℃，5％CO2，95％空气的日制SANYO CO2培养箱内温育2h。取完整透明晶状体分成7组，全部加营养液10ml，除对照组外其余6组均添加30％H2O20.2ml，FeCL32mg。这6组中除氧化组外，其余5组每组加1种抗白内障滴眼液1.0ml。在CO2培养箱内再温育48h，冰浴下制备匀浆，高速离心（10000r／min）10min，取上清测NOS，NO，MDA。
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