2 结果
2.1 人、兔、鼠眼NOS分布与NO水平
收集急性交通事故死亡的人眼球5只(20~30岁),正常SD大鼠11只,新西兰兔6只测定NO水平及NOS活性。
表1 人、SD大鼠、兔眼NOS的分布及NO的水平(±s)
Tab.1 The NO level and NOS activity of human,SD rat and rabbits(±s)
|
NOS U/mgpro. |
NO μmol/mgpro. |
Lens(n) |
Vitreous body(n) |
Retina(n) |
Choroid(n) |
Lens(n) |
Vitreous |
bodyRetina(n) |
Choroid(n) |
Human |
6.45±1.57(5) |
0.46±0.41(3) |
2.48±1.25(5) |
2.87±1.15(5) |
Undetected |
Undetected |
351.75±106.46(4) |
208.15±133.1(4) |
Rabbit |
18.03±8.20(10) |
0.73±0.37(4) |
1.72±0.36(6) |
— |
126.65±67.12(8) |
Undetected |
221.26±94.28(6) |
— |
SD rat |
13.61±2.13(10) |
— |
3.70±1.72(10) |
— |
52.79±20.79(10) |
— |
1315.1±345.30(6) |
— |
表1结果显示晶状体NOS活性大于视网膜、脉络膜,而玻璃体最低,但人、兔眼NO水平晶状体、玻璃体全部测不出,而血管丰富的视网膜、脉络膜NO较高。此外种属间显示差异,SD大鼠晶状体NOS活性是人的两倍,为(52.8±20.8)μmol/mgpro.,SD大鼠视网膜NO是人的4倍。
2.2 氧化应力与5种抗白内障药物影响温育晶状体的NOS活性和NO水平
购40只纯种SD大鼠,体重120g±5g,活宰后将晶状体置入CO2培养箱内温育48h后,冰浴下制备匀浆上清,测定NOS,NO,MDA,结果见表2。
表2结果提示对照组温育晶状体NOS活性为82.56±24.99 U/mgpro.,氧化组比对照组NOS活性上升52.5%(P<0.01),麝珠明目、益视安、晶福组NOS活性与氧化组相似,无显著差异,而海珠神组略低于氧化组,视明露组显著高于氧化组,是对照组的2.15倍(P<0.01)。提示氧化应力诱导NOS活性升高,视明露激活NOS更为明显,其激活的机制尚有待探讨。这5种抗白内障药物均有诱导NOS活化的作用,这种作用是药理的或是病理的尚不清楚。
表2 不同条件对温育晶状体NOS活性及NO水平的影响(±s)
Tab.2 The effect of different condition on NOS activity
and NO level in inocubated lenses(±s)
Group(No.) |
NOS U/mgpro.(n) |
NO μmol/mgpro.(n) |
Control group(1) |
82.56±24.99(6) |
Undetected(4) |
Oxidative group(2) |
126.10±8.07(4) |
Undetected(4) |
(2)+Hanzhushen1.0ml(3) |
107.51±27.04(4) |
196.79±277.31(3) |
(2)+Shezhumingmu1.0ml(4) |
114.17±6.82(4) |
44.95±9.75(3) |
(2)+Yishian1.0ml(5) |
118.09±39.28(4) |
Undetected(4) |
(2)+Jingfu1.0ml(6) |
119.03±5.44(4) |
Undetected(4) |
(2)+Shiminglu1.0ml(7) |
177.91±28.44(4) |
191.279(1) |
测得的NO水平各具特点,对照组晶状体4份匀浆(8个晶状体)全部未能测出NO,可能与NO的物理化学性质有关。NO既溶于水也溶于脂肪,可在细胞内外自由扩散,NO是自由基,性质活泼,半衰期极短,极易失活。本文证实人、兔眼晶状体匀浆上清全部测不出NO,可能与此有关。编号(2)~(7)各组温育介质均含有30%H2O2,FeCL3,过渡金属离子(FeCu)与H2O2的氧化还原反应产生OH+O2-,而NO与O2-作用成ONOO-,继质子化后迅速分解成NO2和羟自由基,看来NO与氧自由基同时存在将产生更强的氧化应力。表2结果显示编号(2)~(7)都浸浴在氧自由基发生体系中,该体系理应测不出NO,但是海珠神组、麝珠明目组各有3份样本分别测出NO,为(196.79±277.31)、(44.95±9.75) μmol/mgpro.,视明露组也有1份测得NO为191.279 μmol/mgpro.。这提示这3种抗白内障药物具有保护NO不被淬灭的作用。
表3 不同条件对温育晶状体MDA水平的影响(n=4,±s)
Tab.3 The effect of different condition on MDA
level in inocubated lenses(n=4,±s)
Group(No.) |
MDA μmol/mg.pro. |
Suppressive(%) |
Control group(1) |
17.17±1.0 |
|
Oxidative group(2) |
22.69±2.5 |
|
(2)+Haizhushen(3) |
15.48±0.44 |
131 |
(2)+Yishian(4) |
15.98±1.2 |
121 |
(2)+Jingfu(5) |
16.14±0.49 |
118 |
(2)+Shezhumingmu(6) |
16.18±1.71 |
118 |
(2)+Shiminglu(7) |
16.64±0.59 |
109 |
Suppressive(%)=(Oxidative-therapeutic)÷(Oxidative group-Control group)
我们使用的氧化应力模型,促使被温育的晶状体LPO作用增强,与对照组相比MDA增高1.5倍,而添加抗白内障药物的5组MDA水平都比对照组低,抑制率超过100%,按抑制LPO作用强度排序依次是海珠神>益视安>晶福>麝珠明目>视明露,提示这些药物都是较强的抗氧化剂。
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