结果

　　一、形态学观察

　　Olympus倒置显微镜下观察, 可见经胰蛋白酶消化所获得的视网膜神经节细胞静置在覆有鼠尾胶原的培养板内。4～6 h开始贴壁；24 h后细胞基本完全贴壁,呈单层排列, 部分细胞聚集成团,细胞呈圆形或椭圆形,核圆且相对透明,少数细胞膜上伸出短而小的突起(图1)；48 h后细胞体积较前稍增大,伸出突起细胞增多;72 h后,少数细胞形成典型的细胞突起,且突起相互连接(图2)；5天后有明显突起的细胞增多,细胞开始死亡, 细胞数目减少；培养7天时,细胞体积明显变小,仅少数细胞残存,多数细胞死亡。

　　图1　培养1天的RGCs,可见少数细胞伸出轴突(箭头)　×40图2　培养3天的RGCs,可见细胞伸出典型的轴突(箭头)　×40

　　二、免疫细胞化学检查

　　应用抗大鼠THY-1单克隆抗体对培养细胞行免疫细胞化学染色,显示RGCs胞浆和轴突染成棕黄色;培养第1天,每10个HP下可见抗鼠THY-1 单克隆抗体阳性染色细胞数平均为(401±9)个,染色阳性细胞中,有轴突生长的细胞数占25.34%;第3天,每10个HP下阳性染色细胞数平均为(351±6)个,有轴突生长的细胞数占35.16%(图3);第5天, 阳性染色细胞数平均为(109±8)个,有轴突生长的细胞数占69.84%(图4)。

　　图3　培养3天Thy-1免疫细胞化学染色,胞浆和轴突染成棕黄色(箭头)　×40图4　培养5天Thy-1免疫细胞化学染色,见部分细胞轴突相互连接(箭头)　×40

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