中华眼底病杂志 1999年第4期第15卷 论著摘要

作者：孙为荣　林红　杨文毅　康菊

单位：266003青岛大学医学院附属医院眼科

　　关键词： 视网膜/酶学；视网膜/代谢；糖醇类/代谢；免疫组织化学；酶类/分析

　　中国图书资料分类法分类号　R322．91　　R446

　　为了研究国人视网膜酶分布情况，我们用酶组织化学法对5只成年眼视网膜的琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase，SDH)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)、苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase，MDH)、葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase，G-6-Pase)、萄萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G-6-PD)、磷酸化酶(phosphorylases，PPR)、三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase，ATPase)、酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、5'-核苷酸酶(5'-nuecleotidase，5'-N)的分布情况进行了测定，报告如下。

　　1　材料与方法

　　取猝死者的正常眼4只(年龄20～30岁)，因眶内恶性肿瘤行眶内容剜出术的眼球1只(48岁)，共5只眼球，沿矢状轴切开为两半，立即放入液氮中(－196℃)冷冻固定(猝死之眼球从猝死到冷冻固定约0.5～1.0小时，眶内容剜出的眼球摘除后即刻投入液氮固定)。然后取出眼球在－20℃的低温恒冷切片箱中平衡0.5小时，取视盘颞侧约1 cm×1 cm之全层眼球壁，切成厚10μm的切片，冷风吹干备用。从每只眼球任取3张切片，共15张切片，用同一孵育液孵育。其中SDH和MDH用Nachlas［1］法，LDH、G-6-PD和ACP用Lojda法［2］，G-6-Pase、ATPase和5'-N用Wachstein和Meisel铅法［1］，PPR用Takeuchi法［1］，ALP用Pearse法［2］。另从每只眼球各取1张切片，共5张切片做染色方法对照，对照方法除SDH加丙二酸钠，LDH去辅酶I，5'-N加β-甘油磷酸钠外，其他酶均用去底物法。所有孵育液温度均为37　℃。酶反应结果由三人在光镜下读片决定，用半定量法分5级记录［3］。

　　2　结果

　　经孵育后各种酶呈现不同颜色反应，猝死者眼与眶内容剜出术摘除的眼球的酶反应未见明显差异。SDH呈紫红色，ATP为棕黑色均主要分布在杆锥体层内段及外网状层。LDH及MDH均为蓝色颗粒，分布情况相似，主要在杆锥体层、神经节细胞层和神经纤维层。G-6-Pase为棕黑色颗粒，PPR为紫蓝色颗粒主要分布在神经节细胞层和神经纤维层。ACP为棕色颗粒，分布在杆锥体层、神经节细胞层与外网状层。ALP除视网膜血管外均呈阴性反应。5'-N为棕黑色颗粒主要分布在杆锥体内段、外核层。

　　3　讨论

　　SDH是线粒体的标志酶，位于线粒体内膜及嵴上，是三羧酸循环重要的酶，催化琥珀酸与延胡索酸间的反应。电镜观察也证明视杆细胞椭圆体中有大量的线粒体［4］，说明视网膜的三羧酸循环主要在此进行。MDH部分位于细胞液中，亦分布于线粒体中，也是三羧酸循环重要的酶，其催化苹果酸氧化为草酰乙酸，并通过呼吸链氧化生成ATP。本研究显示其主要分布在杆锥体内段、神经节细胞层，神经纤维层和外网状层亦有较多分布。PPR是糖原酵解的关键酶，糖原在其作用下脱下葡萄糖分子，然后才能进行酵解和氧化。本研究见其主要分布在内网状层、神经节细胞层和神经纤维层中。

　　LDH存在于细胞浆中，是无氧酵解的重要酶，催化丙酮酸与乳酸间的反应。有人认为，LDH在视网膜的分布与Müller细胞有关［5］。我们的观察表明LDH除沿着Müller细胞分布外，还大量的分布在杆锥体内，中等量分布在神经节细胞层和神经纤维层。

　　G-6-Pase是微粒体的标志酶，专一催化6-磷酸葡萄糖及氨基葡萄糖的分解反应，释放出葡萄糖和磷酸，使其可以通过细胞膜从而对细胞内外的葡萄糖水平起调节作用。本实验见其分布情况与Lessell［5］的结果相同。G-6-Pase的这种分布可能与Müller细胞的功能有关，Müller细胞除对视网膜起支撑作用外，更重要的是视网膜糖原贮存库，在能量代谢和营养交换中起作用。

　　G-6-PD是糖氧化旁路的重要酶。6-磷酸葡萄糖在其作用下脱氢转化成6-磷酸葡萄糖内酯，在反应进行过程中除产生少量能量外，主要为细胞提供大量还原型辅酶Ⅱ，在一些物质代谢中作为供氢体。本研究显示其主要分布于杆锥体内段和外网状层。ATPase可以水解ATP为ADP，放出磷酸和能量，本实验显示ATPase主要分布在杆锥体内段，中等量分布在内核层和内网状层，说明杆锥体除进行着大量产能代谢外，还进行着大量耗能代谢。

　　从以上酶分布提示，视网膜存在三种能量代谢方式：无氧酵解、有氧氧化和磷酸戊糖途径。有人提出视细胞中糖酵解速率比视网膜其它部分高，约50%的代谢活动发生在感光细胞内。本研究亦证明杆锥体层有丰富的酶，此区不但有葡萄糖的有氧代谢，还有无氧酵解，糖原无氧酵解还在神经节细胞层和神经纤维层中，亦可在Müller细胞中进行。磷酸戊糖旁路途径主要在杆锥体内进行。

　　本研究ACP主要分布于杆锥体层，中等量分布于神经节细胞和外网状层。ALP除在视网膜血管处外均呈阴性反应，与Lessell［5］的实验结果一致。5'-N主要分布于细胞核、微粒体和线粒体、高尔基大泡、小泡中，本实验见其主要分布在杆锥体层。

　　参考文献

　　1　Culling CAF．Handbook of histopathological and histochemical techniques．3ed．London:Butterworth co,1974．346,328,339,323．

　　2　Lojda　Z,Gossran RT,Schiebler H．Enzyme histochemistry:a laboratory manul．Berlin:Splinger-Verlag,1979．284,282,98，78，65．

　　3　孙为荣，王靖华，牛膺筠，等.家兔视网膜的酶组织化学研究.眼底病，1989，5：6-8.

　　4　谷运华，周国民，王光辉．眼．见：成令忠，主编.组织学.第二版.北京：人民卫生出版社.1993．662-667，671-672.

　　5　Lessell S,Kuwabara T．Phosphatase histochemistry of the eye．Arch ophthalmol,1964,71:851-854．

(收稿：1999-02-01　修回：1999-06-23)