【摘要】 目的：观察天然冰片及合成冰片对兔眼刺激性及长期毒性作用。 方法：Draize眼刺激性实验。长期毒性实验：32只白色家兔随机分为8组，6个实验组双眼分别滴1,0.5,0.25g/L天然或合成冰片滴眼液，4次/d，连续4wk。空白对照组不用药，溶酶对照组仅用赋形剂。末次点眼后取血做血常规及血生化，计算脏体比系数，取眼球各组织做病理学检查。结果：天然冰片与合成冰片滴眼液对眼局部无刺激性，与对照组相比血常规与血生化检测指标无显著差异，肝脾肾的脏器系数无差异。光镜及电镜结果显示实验组眼球无显著病理改变。 结论：兔眼对天然冰片与合成冰片有较好的耐受性，长期应用无眼局部病理变化及肝肾功能损伤。冰片有望做为渗透促进剂广泛用于滴眼液配方。
【关键词】 冰片；渗透促进剂；眼刺激性；长期毒性
Study on the role of natural borneol and synthetic borneol in eye irritation and chronic toxicity
HongBin Yang1,YanBin Xun2,3, XiaoYu Zhang4, ZhiJian Li1, Ou Cui1, LiQiong Zhang1, Hao Cui1
1 Department of Ophthalmology, the First Clinical College of Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China; 2 China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, Jiangsu Province, China; 3 Heilongjiang Institute for Drug Control, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China; 4 The Second Clinical College of Harbin Medical University, Harbin 150086, Heilongjiang Province, China
AbstractAIM: To observe the irritation and chronic toxicity effect of natural borneol or synthetic borneol on rabbit eyes.
METHODS: Draize eye irritation test was carried out. Chronic toxicity experiment: 32 rabbits were randomly divided into 8 experimental groups. Rabbits in 6 experimental groups received topical 50μL 1, 0.5g/L, and 0.25g/L natural borneol or synthetic borneol eye drops, respectively, 4 times daily for 4 weeks. Rabbits in control group 1 received nothing as normal control and rabbits in control group 2 received 50 uL of vehicle without borneol as negative control. Hematological parameters and organ coefficient were detected. Histopathological examination was made by light microscope and transmission electron microscopy.
RESULTS: Natural borneol and synthetic borneol could not lead to eye irritation. Compared with the control group, blood routine biochemical parameters and organ body coefficient of liver spleen and kidney of experimental group showed no significant differences. Histopathological examination indicated no change in experimental group.
CONCLUSION: There is a well tolerance on rabbit eye to natural borneol and synthetic borneol. Borneol has value for incorporation into ocular formulations.
KEYWORDS: borneol; penetration enhancer; eye irritation; chronic toxicity
Yang HB, Xun YB, Zhang XY, et al. Study on the role of natural borneol and synthetic borneol in eye irritation and chronic toxicity.
Int J Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi)2008;8(11):22282231
0引言
天然冰片（右旋龙脑）为樟科植物樟Cinnamomum camphora(L.)Presl的新鲜枝叶经提取加工制成的结晶[1]。合成冰片是经化学方法合成而得。天然冰片与合成冰片均具有去翳明目，消肿止痛的功效。由于天然冰片来源匮乏，临床上常用合成冰片替代天然冰片，但某些中成药仍采用天然冰片入药。冰片在眼用制剂中应用很广泛：珍视明滴眼液、珍珠名目滴眼液、八宝眼膏等均含有冰片。一方面冰片具有抗炎抗病毒的药理学作用，另一方面冰片可以增加其它药物的角膜渗透性，是一种很有应用前景的渗透促进剂。合成冰片可以增加葛根素滴眼液在兔离体角膜的通透性。冰片能够促进秦皮甲素透过兔角膜上皮细胞。冰片可以促进中医眼科外用药病毒一号的眼部吸收。冰片能够使兔角膜上皮细胞膜的磷脂双分子层运动更加有序, 从而增加角膜上皮细胞的通透性[2 4]。冰片能否作为渗透促进剂与其它药物广泛配伍应用，还取决于它在机体的毒性作用。对于天然冰片与合成冰片局部应用的比较研究还少有报道，本课题研究两种冰片滴眼液高、中、低剂量组兔局部点眼后眼刺激性及长期的毒性作用。
1材料和方法
1.1材料 天然冰片（吉安林科天然冰片厂）经检测右旋龙脑含量98.7%，合成冰片(广州市黄埔化工厂)龙脑含量57.6%，均符合中国药典（2005年版一部）规定。实验用水为重蒸水，其它试剂为市售AR级。天然及合成冰片滴眼液（自制），高、中、低剂量组分别为1,0.5,0.25g/L。另配置空白溶媒滴眼液，检测各滴眼液pH值及渗透压均符合眼用制剂要求。健康白色家兔（哈尔滨医科大学第一临床医学院动物室提供），雌雄不拘，质量2.5～2.8kg。在实验开始前的24h用20g/L荧光素钠角膜染色裂隙灯下观察，有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不纳入实验。常规饲料喂养，饮水不限制。
1.2方法 Draize实验：28只白色家兔随机分为7组，每组4只。第1组溶媒对照组，第2～4组天然冰片高、中、低剂量组，第5～7组合成冰片高、中、低剂量组。所有动物均左眼滴试药，右眼滴生理盐水做自身对照。给药方法为轻轻拉开家兔眼睛的下眼睑，将受试药50μL滴入结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合3s，以防止受试药物丢失。给药后1，2，4，24，48，72h以及7d裂隙灯观察滴眼液对角膜、虹膜和结膜的刺激反应。在每次检查中按眼刺激反应的评分标准记录积分。将每一个观察时间每一动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应分值相加得总积分，将一组的积分总和除以动物数，即得最后分值。0～3分无刺激性，4～ 8分轻度刺激性，9～12分中度刺激性，13～16分强度刺激性。长期毒性实验：32只白色家兔随机分为8组，每组4只。1组空白对照组，2组溶媒对照组，3～5组天然冰片高、中、低剂量组，6～8组合成冰片高、中、低剂量组。双眼给药，给药方法同刺激性实验。4次/d，连续4wk。28d时末次点眼后耳缘静脉取血6mL，分别作血常规及血生化。取眼球各组织做病理学检查。处死家兔后进行尸解,观察并取心、肝、脾、肺、肾等主要脏器进行称重,以脏器质量/体质量×100%计算脏体比系数。
统计学处理：数据采用SPSS 16.0统计软件处理,所有计量资料以±s表示，统计学方法为oneway ANOVA,多个样本均数间比较采用SNKq检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1一般情况 实验期间,每日观察动物的外在特征、行为活动、皮毛、饲料消耗等情况。各组动物均未见烦躁不安、呼吸加快、进食减少等异常，无动物死亡。
2.2刺激性评分 合成冰片高剂量组积分2.5分，合成冰片中剂量组积分1.5分，合成冰片低剂量组积分0.5分；天然冰片高剂量组积分1.75分，天然冰片中剂量组积分1分，天然冰片低剂量组积分0.5分；溶媒对照组积分0.5分。均<3分，对眼睛没有刺激性。
2.3血液参数 血液参数测定结果及脏体比系数（表13）。
2.4光镜观察结果 高倍镜下各剂量组眼球各组织结构清晰可见，角膜的上皮层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层排列规整细胞形态正常（图1,2）。虹膜横切面可见四层结构，视网膜的RPE层及神经视网膜以及视神经均未见炎性细胞浸润及出血坏死等情况。
2.5电镜观察结果 各组兔角膜组织在电镜下可见角膜图1天然冰片高剂量组角膜（HE染色，×200）
图2合成冰片高剂量组角膜（HE染色，×200）
图3天然冰片高剂量组角膜（醋酸铀枸橼酸铅双重染色，×8000）
图4合成冰片高剂量组角膜（醋酸铀枸橼酸铅双重染色，×8000）
上皮、基质及内皮。对照组基质中成纤维细胞呈梭形,胶原纤维排列整齐,粗细均匀。天然冰片及合成冰片高剂量组上皮细胞核表面有明显的切迹，核内异染色质块状散在分布。基质纤维排列规整，基质细胞较少，内皮细胞核内染色质疏松，核旁可见少量的空泡样物质（图3,4）。与对照组相比各组织切片未见显著性的病理改变。 表1冰片滴眼对家兔血常规的影响表2冰片滴眼对家兔血生化的影响表3冰片滴眼对家兔脏器系数的影响
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