惠延年，郭斌，王应利
    第四军医大学西京医院眼科，全军眼科研究所

    研究背景与目的：血视网膜内屏障（iBRB）主要由视网膜微血管内皮细胞及细胞间紧密连接形成，其功能依赖于紧密连接状态。iBRBd的破坏见于多种视网膜血管病，如糖尿病视网膜病变及黄斑水肿；与视网膜新生血管形成也有密切关系。利用视网膜微血管内皮细胞（REC）和视网膜胶质细胞（RGC）建立的iBRB体外模型，观察其紧密连接与细胞旁通透性的变化；并研究视网膜微血管周细胞（RPC）对REC生长和紧密连接形成的影响。

    方法：用免疫磁珠分离和原代培养大鼠REC和RPC，用改良消化法培养大鼠RGC，并鉴定其生长和免疫学特征。观察RGC对REC增生和迁移的影响。使REC和RGC分别生长在微孔膜的内、外底面上，建立iBRB模型；电镜观察细胞间紧密连接的形态；测量跨内皮电阻（TER）；检测紧密连接蛋白ZO-1的表达；检测iBRB对蔗糖、菊糖和白蛋白的通透系数；统计学分析TER和通透系数之间的数量关系。观察在常氧和缺氧条件下，RPC对REC增生、迁移和管腔形成的作用，REC的Flk-1/KDR受体对其的调节；对REC细胞紧密连接复合物occludin、ZO-1及actin表达的影响，以及RPC衍生的血管生成素1（AG-1）的作用。

    结果：与RGC共培养的REC生长加快，迁移增加。iBRB模型中，紧密连接形成；ZO-1先后在REC胞浆和细胞核内表达，并呈线状封闭细胞间隙，半定量结果与TER值呈正相关；共培养层TER峰值为113.5 ± 5.3 Ω cm2，高于REC单层；共培养层对3种分子的通透系数明显降低；TER根方值与3种分子的通透系数根方值存在直线相关关系。RPC抑制REC增生、迁移和管腔形成，其作用部分通过抑制其Flk-1/KDR受体表达实现；RPC可提高REC紧密连接蛋白的表达，促进其分布，此作用部分通过分泌AG-1实现。

    结论：RGC可以促进REC的增生和迁移，两者在微孔膜上共培养可建立体外iBRB模型，RGC可促进REC紧密连接形成，并提高屏障功能；TER与细胞旁通透系数之间存在精确的量化关系。RPC可抑制REC增生和管腔形成，上调紧密连接蛋白表达，降低REC通透性。这提示，RPC丢失可能是微血管及新生血管渗漏的原因。

    关键词：血视网膜内屏障  视网膜微血管内皮细胞  紧密连接  周细胞  视网膜胶质细胞 跨内皮电阻  通透系数

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