陈涵

复旦大学附属眼耳鼻喉科医院200031

目的：采用STZ诱导的糖尿病大鼠模型，对成模早期及正常大鼠的神经视网膜进行蛋白组学液相色谱串联质谱分析。对各时点比较后得到有意义的差异蛋白，筛选视网膜神经病变相关因子，建立时间梯度，为纵向功能性研究打下基础。

方法：

1.成年雄性SD大鼠体重250g-300g，SPF级，60只分为5组，每组各12只。按时间间隔建模(时点1w， 2w， 4w， 6w， 8w)，腹腔注射STZ 60mg/kg， 血糖高于16.7mmol/l确定造模成功。
2.大鼠处死后取神经视网膜混合，提取全蛋白，酶解后ITRAQ定量试剂盒标记，用LC-MS/MS进行分析。对差异蛋白进行生物信息学分析。
3.采用免疫组化、Western-Blotting、PCR等方法对差异蛋白进行纵向对比分析。

结果：

1.大鼠视网膜样本提取蛋白后2-PADE电泳跑胶，得到清晰的条带和蛋白点。
2.蛋白酶解后，用ITraq试剂标记各组样品，等量混合。清晰的肽指纹图谱显示样品酶解完全。
3.选取了其中的肽段做了MSMS分析，并将谱图局部放大显示三个峰的定量信息。发现各组间存在差异蛋白。

结论：

糖尿病大鼠模型成模后各时点分组与正常大鼠视网膜比较分析可发现差异蛋白。氧化应激、急性期反应、胶质细胞活化相关蛋白及凋亡相关因子的表达可能上调。差异蛋白的定性定量、相关时间梯度及信号通路有待进一步研究。

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