【摘要】 目的：研究微脉冲半导体激光和氩激光对兔眼视网膜损伤的形态学改变。方法：有色兔8只16眼，每只兔的两眼随机分别行810nm微脉冲阈下光凝和514nm氩绿激光光凝，在黄斑水肿治疗参数下，光凝后即刻观察光斑反应并在光镜和电镜下观察其对视网膜和脉络膜造成的组织学改变。结果： 微脉冲激光阈下光凝后光斑不可见，氩激光光凝后可见光斑反应；激光后即刻两者光镜下视网膜感光细胞损伤不明显但脉络膜毛细血管、小静脉轻度充血，电镜下氩激光光凝处外节排列稀疏，色素上皮细胞和节细胞肿胀，外颗粒层细胞异染色质增多。微脉冲光凝处外节排列较整齐，外颗粒层变化不明显。结论： 微脉冲激光光凝视网膜较氩激光损伤更轻微。
【关键词】 微脉冲 氩激光 视网膜光凝 损伤 兔
微脉冲半导体激光是用短促高频的阈值下能量治疗视网膜病变，可以获得与现有常规激光相同的治疗效果，并能最大限度地减少对视网膜内层的损伤，对保护激光治疗眼的视力有重要意义。现在最常用的热源是810nm近红外半导体激光[1]。国外临床研究显示目前它最常用于糖尿病黄斑水肿的治疗，且治疗参数多用5％负载系数，100～300mW能量，125μm光斑[24]。然而国内对其研究甚少，微脉冲激光治疗黄斑水肿是否比氩激光有更大的损伤性？为解决上述问题，我们通过对成年有色兔正常视网膜进行微脉冲激光阈下光凝和氩激光常规光凝，观察激光后它们各自发生的形态学变化及视网膜损伤，试图为微脉冲激光对人眼视网膜损伤提供实验参考。
1材料和方法
1.1材料
健康成年有色兔8只16眼，体质量1.8～2.2kg，雌雄不限，由新疆医科大学动物实验中心提供，实验前双眼前节和眼底检查均正常。SLX810nm半导体激光治疗仪（美国IRIS公司），氩离子激光机（美国Coherent公司），Topcon TRC50IX眼底荧光造影仪（日本Topcon公司），JEOLJEM1230型透射电子显微镜（日本JEOL公司），OLYMPUS双目生物显微镜（日本Olympus公司），LKB2188型超薄切片机（美国Leica公司）。
1.2方法
2.5g/L托吡卡胺滴眼液散瞳,30g/L戊巴比妥钠溶液按1mL/kg经兔耳缘静脉麻醉后,角膜置广角眼底接触镜。每只兔的两眼随机分别行810nm微脉冲阈下光凝和氩绿激光光凝，为使相对应比较的光凝灶具有接近的视网膜条件（减少因中心至周边视网膜厚度或激光激射角度微小差异的可能影响），以视盘为标志，距视盘2PD的下方作10×10个光斑的光凝区，光斑直径200μm，间隔一个光斑距离，曝光时间810nm激光0.2s，氩激光0.1s。实验表明要得到近Ⅰ级反应的光斑，氩激光能量为50～55mW,要得到可见的阈值反应强度的光斑，810nm激光所需能量为130～200mW，由此可得5％负载系数，4倍阈能量的微脉冲阈下能量为520～800mW。光凝后即刻（2h内）行眼底照相及眼底荧光造影观察光斑变化。光凝后24h空气栓塞法处死实验兔，摘除眼球，取出眼前节及玻璃体，随机将6只兔12眼投入100g/L甲醛中固定、梯度酒精脱水后切取光凝组织，再脱水、浸蜡和石蜡包埋，做4μm连续切片，常规HE染色。另快速准确地切取其余2只兔4眼光凝组织，40g/L戊二醛液固定24h以上，将其切成1mm×2mm的条块，继续固定24h，0.1mol/L磷酸缓冲液浸洗30min，10g/L四氧化锇1mL固定1.5h，再用磷酸缓冲液1.5mL冲洗15min，500、700、900mL/L丙酮脱水各15min，1000mL/L丙酮脱水10min，EPON812还氧树脂包埋，37℃温箱过夜，60℃温箱放置48h，LKB—2188型切片机切取1μm半薄切片,定位后切取超薄切片，铅－铀双重电子染色，电镜观察超微结构变化。
2结果
2.1眼底观察
微脉冲光凝视网膜后眼底照相未见视网膜光斑,眼底荧光造影未见荧光素渗漏，而氩激光光凝处眼底照相可见淡灰白色Ⅰ级光斑，眼底荧光造影可见荧光素渗漏。
2.2光镜观察
正常兔眼视网膜层次结构清晰，感光细胞排列整齐，色素上皮层连续、规则。微脉冲光凝处和氩激光光凝处视网膜略呈小丘状隆起，且前者隆起较后者轻微，神经上皮层和色素上皮层连续性完整，仅见其下脉络膜毛细血管、小静脉轻度充血，无出血。
2.3电镜观察
正常兔眼视网膜外节排列整齐，外核层排列紧密，染色质分布均匀，色素上皮细胞正常。光凝后即刻微脉冲光凝处神经节细胞、内核层及外核层变化不明显，外节段排列轻微紊乱（图1A），色素上皮细胞内轻微内质网扩张，其内可见髓样小体（图1B）。氩激光光凝处外节膜盘排列稍稀疏（图2A），色素上皮细胞内质网扩张、线粒体肿胀较明显（图2B），外核层细胞和Müller细胞内异染色质增多，内核层变化不明显，神经节细胞轻微肿胀，其细胞核、细胞质基质变淡。
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