【摘要】目的：利用猴脉络膜一视网膜内皮细胞建立内皮细胞(EC)单层模型，观察高浓度葡萄糖及血管生成素一1(Ang一1)对该模型通透性的影响．方法：待EC于孔径0．8 m的聚碳酸酯微孔滤膜上形成致密单层后分3组进行培养：对照组(DMEM培养基含25 mmol／L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含30 mmol／L葡萄糖)、Ang一高糖组(DMEM培养基含30mmol／L葡萄糖+0．25 mg／L Ang一1)．于1，3，5，7 d 4个时问点，以含白蛋白1 g／L的D—Hanks液灌注滤膜，检测蛋白质渗透压反射系数(8)及滤过系数(K )；并于5 d和7 d利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder．结果：3，5，7 d时，高糖组EC单层的通透性高于对照组(P<0．01)；Ang一高糖组与对照组之间EC单层的通透性无差异(P>0．05)．高糖组EC的琼脂糖凝胶电泳在5 d及7 d均出现DNA ladder，对照组及Ang一高糖组未见DNA ladder．结论：高糖能够促进细胞凋亡，增加EC单层通透性；Ang一1能抑制EC的凋亡，对抗高糖所致的EC单层通透性增高．

【关键词】脉络膜；视网膜内皮细胞；血管生成素一1；高糖；通透性：猴

【中图号】R774，1 【文献标识码】A

O 引言

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)可导致患者视力下降甚至失明，是糖尿病(diabetes mellitus，DM)最常见和最严重的微血管并发症．DR早期就有微血管渗漏的病理改变，而微血管病变是DR发病的基本环节¨J，抑制微血管渗漏对于预防和治疗DR，提高患者生活质量具有重要的意义．血管生成素一1(angiopoietin-1，Ang一1)在维持血管稳定性、防止血管渗漏等方面发挥着重要作用 -61．Ang一1基因敲除小鼠的血管渗漏明显增加 J，同时还出现静脉血管畸形 ；而皮肤特异性表达Ang一1增高的转基因小鼠和注入腺病毒载体构建的Ad-Ang．1小鼠，均能有效抵抗芥子油、5．羟色胺、血小板活化因子等增强渗漏的因子所引起的血管渗漏作用 J．此外，也有人证明Ang．1能降低内皮细胞(endothelial cell，EC)单层的基础通透性_6 J．然而，在高糖环境中，Ang．1对EC的影响及其机制少见报道．从猴的胚胎取出的脉络膜一视网膜的EC相当于成年猴视网膜血管的Ec，可以用做视网膜血管EC的替代品并研究其特性．本研究即以这种脉络膜．视网膜EC来探讨Ang一1对高糖环境中EC的保护作用及其机制，为临床治疗DR的视网膜微血管渗漏奠定基础．

1 材料和方法

1．1 材料猴脉络膜一视网膜内皮细胞(中科院上海细胞库)；胎牛血清(华美生物工程公司)；考马斯亮
蓝(南京建成生物公司)；DMEM培养基(Gibeo生物工程公司)；牛血清白蛋白(华美生物工程公司)；D．
葡萄糖(Sigma公司)；Ang一1(Sigma公司)；直径25mm，孔径0．8 m聚碳酸酯微孔滤膜(Whatman公
司)；电泳仪(PowerPac 3000，Bio Rad公司)；超声波细胞粉碎机(92一Ⅱ型，宁波新芝科器研究所)．

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