基础             103                                      PO0091

　　转染Smad7基因对人Tenon囊成纤维细胞增殖、细胞周期和迁移作用的影响

　　陈君毅 孙兴怀

　　复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科  200031

　　目的  观察转染Smad7基因对人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）增殖、细胞周期和迁移的作用。

　　方法  使用NucleofectorTM核酸转染仪将pCMV5-Smad7真核表达质粒转染HTFs细胞，并用G418筛选获得稳定转染细胞克隆。分别使用BrdU掺入法检测细胞增殖的改变，流式细胞仪检测细胞周期的改变，Transwells法检测细胞迁移的改变。观察外源性TGF-β2刺激对上述指标的影响。以未转染的HTFs及转染空载质粒的HTFs（pCMV5-HTFs组）为对照。

　　结果  外源性TGF-β2作用后，HTFs及pCMV5-HTFs组BrdU阳性细胞比例明显较未作用时减少，分别是原来的73.8％和73.1％（P<0.01）；pCMV5-Smad7-HTFs组，作用前后BrdU阳性细胞比例无明显差异（P>0.05）；pCMV5-Smad7-HTFs组BrdU阳性细胞数明显较两个对照组多，分别是两个对照组的133％和142％（P<0.01）；TGF-β2作用前后相比，HTFs 和pCMV5-HTFs组G0/G1期比例无明显改变（P>0.05），S期比例下降（P<0.05），细胞增殖受到抑制；pCMV5- Smad7-HTFs组G0/G1期比例、S期比例无明显改变（P>0.05），细胞生长并未受到明显抑制；pCMV5- Smad7-HTFs组细胞S期比例明显较对照组多，分别是HTFs 组和pCMV5-HTFs组的1.8倍和1.5倍（P<0.01），G0/G1期比例明显低于对照组（P<0.01）；Transwells检测，外源性TGF-β2作用能够轻度提高三组细胞迁移性，但作用前后差异无统计学意义（P>0.05）；三组细胞间相互比较，迁移的细胞数差异无明显统计学意义。

　　结论  外源性TGF-β2作用能够明显减少HTFs细胞BrdU阳性细胞数，降低S期比例，从而抑制HTFs细胞的增殖；转染Smad7基因能够拮抗外源性TGF-β2的增殖抑制作用，BrdU阳性细胞数，G0/G1期、S期细胞比例，与作用前相比无明显差异；Smad7基因对HTFs细胞迁移无明显作用。

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