基础             2463                                      PO0151

    牛眼脉络膜毛细血管内皮细胞对AGEs的内吞作用

    李若梅，P. McCourt, 刘熙朴, B. Smedsrød, K.K. Sørensen

    挪威Tromso大学眼科学系及实验病理学系

    目的：探明脉络膜毛细血管内皮细胞（CCE）是否具有对AGEs (Advanced glycation end products)修饰蛋白进行摄取及降解的作用，探明CCE是否具有介导AGEs内吞作用的特异性受体。

    方法：建立CCE体外培养体系，将AGE-BSA 进行 Na125I标记和纯化或进行Rodamine标记，将CCE等量接种到2cm2孔培养板，培养至细胞汇合后，将细胞与200 ml 含1% (w/v) HSA, 抑制剂或微量放射标记蛋白的无血清RPMI 于37 C 5% CO2 环境中培养不同时间，以TCA沉淀法定量可降解部分及细胞相关部分放射性标记物含量，以两部分放射性强度之和计为内吞强度。在进行内吞实验前，将培养细胞与含有不同浓度的兔抗大鼠Stabilin-2 IgG 抗体或未免疫兔IgG（阴性对照）的培养液在37 C状态下预孵30 min进行抗体抑制试验。将CCE培养在盖玻片上，经4% 福尔马林固定后，将细胞进行Stabilin-2、stabilin-2 C-末端IgG 及CD31抗体免疫组化染色。对牛眼RPE-脉络膜进行冷冻切片及Stabilin-2 抗体免疫组化染色。

    结果：培养CCE及冷冻眼组织均显示CCE呈现两种类型的 Stabilin阳性显色和表达。培养CCE具有摄取125I-AGE-BSA 和 125I-FSA的作用，CCE在1h和8h所摄取这两种标记物的量分别为7.3% 、5％和26%、58％。这种摄取作用可为过量的非标记大分子物质 (100 mg/ml)所抑制，其中，AGE-BSA、FSA和 FITC-FSA可分别抑制92.63%、75.5% 及 96.05%的放射标记物摄取量，而作为对照的甘露聚糖却没有这种抑制作用。 将CCE与兔抗大鼠Stabilin 2 IgG抗体或非免疫的兔IgG进行孵育，兔抗大鼠Stabilin 2 IgG抗体对细胞摄取125I-AGE-BSA呈现剂量相关的抑制作用。

    结论：牛眼CCE具有内吞AGEs的作用，Stabilin 2受体是CCE的这种内吞作用的重要介导受体。

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