基础             2557                                      PO0154

    间充质干细胞横向诱导分化为角膜上皮细胞的实验研究

    杨海军 易敬林

    江西省人民医院江西省眼科中心 330006

    目 的  探讨间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在体外向角膜上皮细胞横向分化的可能性，为眼科临床中治疗角膜上皮细胞和角膜缘干细胞的缺乏或功能紊乱提供新思路。

    方 法  取无恶性血液病的32～65岁的成人骨髓各7例，采用梯度离心法分离培养间充质干细胞，取第5 次传代的成人骨髓MSCs，接种于有盖玻片的12孔培养板内(细胞数为2×104 个/ 孔)，分别加入以下5种混合培养基进行培养，每种加2孔：（1）DMEM/F12、10％FBS；（2）DMEM/F12、10％FBS、5μg/ L EGF；（3）DMEM/F12、10％FBS、10μg/ L EGF；（4）DMEM/F12、10％FBS、15μg/ L EGF；（5）DMEM/F12、10％FBS、50％条件培养基、10μg/ L EGF。每3天换一次上述培养液。培养30天后，取出爬有细胞的盖玻片，进行AE1和AE5的免疫组化染色。

    结 果  AE1的免疫组化染色显示：对照组没有细胞着色，第2～5组都有细胞着色，第2～4组细胞的着色数目和着色的深浅逐渐增加。说明EGF可以诱导成人骨髓MSCs向角膜上皮细胞方向分化，而且具有浓度依赖性，15μg/ L比10μg/ L作用强，10μg/ L比 5μg/ L作用强。而第5组细胞的着色数目和着色的深浅与第3组相近，说明50％条件培养基对成人骨髓MSCs诱导分化为角膜上皮细胞没有明显促进作用。AE5的免疫组化染色显示各组的细胞都被均匀的着色，着色的深浅程度为淡染。

    结 论  在EGF等因子的诱导下MSCs的细胞角蛋白合成量增加，有向角膜上皮细胞分化的可能性。5μg/ L～15μg/ L的EGF都能诱导MSCs横向分化为角膜上皮细胞，而且在此浓度范围内EGF的诱导作用逐渐增强。

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