角膜结膜及泪器病             849                                      PO0227

　　氯离子通道-3反义寡核苷酸在内皮素-1对体外培养牛角膜内皮细胞增殖中的作用

　　胡维琨 张虹 李贵刚

　　华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科 430030

　　目的  观察氯离子通道-3（chloride channel 3 ，ClC-3）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides,AS-ODN）在内皮素1(endothelin-1，                 ET-1)对体外培养牛角膜内皮细胞（bovine corneal endothelium cells，      BCECs）增殖和ClC-3表达的影响中的作用。

　　方法 BCECs细胞悬液接种培养12h后，通过脂质体介导转染不同浓度的ClC-3寡核苷酸于体外培养BCECs，作用24h后加入200 pM ET-1，继续培养48h。倒置荧光显微镜观察BCECs寡核苷酸的摄取。采用逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法检测ClC-3mRNA和蛋白的表达。采用四甲基偶氮唑盐比色分析法（MTT法）观察BCECs增殖状况，计算细胞存活率，同时应用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化，计算细胞增殖指数。

　　结果  寡核苷酸可被培养BCECs摄取。ClC-3 mRNA及其蛋白的表达结果变化呈平行关系。与对照组相比，ClC-3 AS-ODN浓度依赖性地减少BCECs ClC-3 mRNA和蛋白的表达。同时ClC-3 AS-ODN浓度依赖性地降低BCECs MTT吸光度值（OD值）和细胞存活率。经100µg/ml ClC-3 AS-ODN处理后，与对照组相比，细胞G0/G1期细胞比例明显增高，S期及G2期细胞比例则明显降低，出现明显的凋亡峰，增殖指数明显下降。

　　结论  ClC-3 AS-ODN可能通过减少ClC-3 mRNA和蛋白的表达，浓度依赖性抑制ET-1对培养BCECs增殖作用，并使细胞周期停滞在G1期。

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