青光眼             1049                                      PO0447

　　睫状神经营养因子在兔慢性高眼压动物模型中对视网膜神经节细胞的保护作用

　　祝剑锋，李运

　　山东临沂地区人民医院博爱眼科医院，276003）

　　目的：研究在高眼压动物模型中，睫状神经营养因子对视网膜神经节细胞的保护作用

　　方法：健康新西兰大白兔13只，随机分为A、B、C、D四组，每组3只，用前房注射羟甲基纤维素法制成慢性高眼压动物模型，分别观察7天（A组）、14天（B组）、21天（C组）、28天（D组）。每只兔一眼为实验组，玻璃体腔内注射睫状神经营养因子，另一眼为对照组玻璃体腔内注射等体积生理盐水；另外一只兔为正常对照（2眼）。术后每日固定时间观察眼压。如测IOP连续两日低于30mmHg，即行前房内羟甲基纤维素注射，实验组于术后1周、2周、3周分别重复玻璃体腔内注射5ug/ml的睫状神经营养因子0.1ml，对照组加注同等剂量的林格式液。分别于术后7、14、21、28天行眼底照相。术后第7天处死A组兔子；术后第14天处死B组兔子；术后第21天处死C组兔子；术后第28天处死D组兔子。完整摘出眼球行常规HE染色观察视网膜的形态变化并计数存活的神经节细胞，用蛋白印迹法测定视网膜中CNTFRα蛋白的表达。

　　　结果：眼部表现：各组兔子术后可见炎性反应，如结膜充血、角膜水肿。5只兔子可见前房内渗出，2只见前房出血。但都于术后5～7天吸收。术后眼压：各组兔子术后眼压稳定，基本可以维持在30mmHg以上，平均持续5～6天。建模前后各时期对照组与实验组眼压比较无统计学意义（P＞0.05）。眼底改变：兔子7d照相显示两组眼底尚正常；14d对照组可见血管移位，视乳头色淡；21d对照组视乳头凹陷明显扩大，血管屈膝，实验组可见视乳头凹陷加深，但血管形态尚正常；28d时，对照组可见视乳头出血，实验组开始出现血管屈膝现象。经统计学处理，建模前及建模后７天，杯盘比两组比较无统计学意义（P＞0.05），14天后杯盘比，对照组较实验组扩大（P＜0.05）。病理学观察：正常对照组兔子视网膜节细胞层细胞分布均匀、紧密，形态、大小近似平均数目（17.90±2.23）/mm2。建模后7天，对照组神经纤维层变薄，神经节细胞排列稀疏，数目（11.70±1.34）/mm2，较正常组下降（P <0.05）；实验组为（14.20±1.93）/mm2，较对照组神经节细胞的存活多，两组间节细胞数目比较有明显差异（P <0.01）。第四周，实验组神经节细胞数目仅为（5.30±1.25）/mm2。且可见节细胞凋亡后剩余的固缩的细胞核（箭头所示），但对照组几乎不能见到神经节细胞（2.30±0.82）/mm2，两组比较有非常显著性差异（P <0.001）。内核层细胞层数仅约2～3层，细胞排列稀疏。CNTFα蛋白电泳：用兔抗人、兔、大鼠、小鼠CNTFRα抗体识别CNTFα蛋白，分子量约为55KD。正常组仅有少量CNTFα蛋白表达。实验组视网膜中CNTFα蛋白从第一周开始升高，第二周CNTFα蛋白表达水平明显升高（P <0.05），到第三周达到高峰（P <0.01），第四周开始消退。对照组CNTFα蛋白第一周表达开始出现减少，以后各组相对比较逐渐下降，组间比较具有统计学意义（P <0.05）。且对照组与实验组比较，CNTFα蛋白减低（P <0.01）。

　　结论：1.眼压、眼底照相及病理学改变显示慢性高眼压模型建模成功。

　　2.在慢性高眼压模型中随着时间的延长，有明显的神经节细胞死亡，提示高眼压为神经节细胞死亡的一个重要原因。

　　3.在慢性高眼压动物模型中，睫状神经营养因子对视网膜神经节细胞有部分的保护作用。

　　关键词：睫状神经营养因子（CNTF） 睫状神经营养因子受体α（CNTFRα）      慢性高眼压动物模型   视网膜神经节细胞（RGC）

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