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3讨论
重建人工生物角膜最大的难题是载体材料。不适合的支架材料无法满足培养角膜细胞的生长，有的人工合成材料不能全部满足透明性好，抗拉力强大等要求，甚至在植入后发生角膜基质溶解和钙沉积等问题。异种角膜基质由于其具有和角膜最接近的光学性能、韧性、天然结构相似，以及来源广泛等优点，成为近年来的研究热点之一。王智崇等[3] 通过动物实验从细胞免疫和体液免疫两个方面，对角膜三 层含细胞组织的免疫原性进行相对量化分析，得出了三者间免疫原性的比率，验证了角膜内皮免疫原性最强，基质免疫原性最弱的结论，表明角膜基质有进行异种移植的免疫学基础，为临床应用异种角膜基质提供了理论依据。
近年来，先后有学者研究采用人羊、膜、猪等异种脱细胞基质为载体构建部分人工生物角膜组织[4，5],我们也对上述载体进行了实验研究，认为羊膜作为载体，虽具有良好的组织相容性、抗炎和抗新生血管的作用，但韧性差，干细胞在其上生长不均匀，易脱落。猪角膜脱细胞基质作为载体虽具有天然角膜的板层纤维结构、韧性及厚度，但由于大部分猪在屠宰时，先在沸水中烫毛，这样往往伤到角膜，使角膜基质处理后难以保持透明，限制了它的应用。
本研究采用鸵鸟角膜基质作为载体材料，原因：（1）鸵鸟角膜韧性较强，抗拉力强大，不易发生溶解，干燥脱水法保存角膜基质复水后透明性好；（2）我们通过测定发现鸵鸟的角膜曲率半径内皮细胞计数和人角膜极相似；（3）有研究显示鸵鸟—兔板层角膜移植在早期能完全保持透明，未观察到超急性排斥反应的发生，无感染、层间积血、层间积液、崩线情况出现，无1例发生溶解[6]。说明鸵鸟角膜植片作为异种植片移植时有较好的生物相容性；（4）由于供体来源所限，有术者报告用新鲜异种（鸭、鱼）角膜移植治疗角膜穿孔，并取得较好的治疗效果[7，8]；还有西安市眼科医院朱秀萍等[9]自1976年开始,用干燥脱水法长期保存的角膜及角巩膜植片成功的为1287例患者进行角膜移植术后,术后植片透明率平均为94.9%，亦奠定了以干燥脱水法保存鸵鸟角膜基质作为组织工程支架材料的基础。我们在培养成功角膜缘干细胞的基础上，首次以干燥脱水法保存的鸵鸟角膜基质为载体成功的构建了兔角膜上皮组织，经形态学及免疫学检测，其具有角膜上皮细胞特异性K3的表达[10]，显示上皮细胞的表型与正常角膜相符。同时免疫学检测表明具有角膜缘干细胞增殖力标志物PCNA的表达，证实构建组织中角膜缘干细胞的存在,这与Ralph的研究结果相符。 Ralph等对14例角膜组织进行PCNA的免疫组化染色，发现未经培养的组织中只有角膜缘干细胞内含PCNA[11]。
目前，随着人工大规模养殖鸵鸟的不断普及，加之我们拥有西安市眼库，获取角膜、干燥法保存角膜基质技术已经成熟，尽管构建的上皮组织，还存在着诸多待研究的问题，如细胞排列紊乱、上皮细胞层数少，无神经支配等。但我们相信随着体外培养环境的不断优化，动物实验的不断深入，这些问题会逐渐解决的。生长有干细胞及由干细胞分裂增殖的各层上皮细胞基质膜片的培养成功，为体外培养角膜缘干细胞的临床应用奠定了基础，为人工生物角膜的研究开辟了一条新途径。
【参考文献】
1李沁华.角膜组织工程的研究进展.中国修复重建外科杂志2004;18(3):230
2朱秀萍, 银勇, 刘先宁,等.干燥脱水法长期保存角膜及角巩膜植片的组织活性研究.眼科研究2002;20(2):136
3王智崇,葛坚,徐锦堂,等.角膜不同组织免疫原性分析.中华眼科杂志2002;38(9):535538
4刘蕾，洪晶.以不同性质羊膜为载体培养人角膜缘干细胞的生物学特性.国际眼科杂志2006;6(5)：10301034
5范先群， 陈苹 ，傅瑶.以异种角膜脱细胞基质为载体构建角膜上皮载体内皮复合物的实验研究.中华眼科杂志2007;43（5）:437 441
6潘东艳，柳林，刘银萍.鸵鸟角膜对兔板层角膜移植的排斥反应.国际眼科杂志2005;5(4):651
7韩真真.用甘油保存同种角膜及新鲜异种角膜移植治疗角膜穿孔.中西医结合眼科1994;2:9192
8马生虎,陈建宏,金秉义,等.异种角膜移植术临床研究.眼科新进展2000;20(1):43 44
9朱秀萍, 银勇, 刘先宁,等.干燥脱水法长期保存角膜及角巩膜植片的组织活性研究.眼科研究2002;20(2):135
10 Schermer A, Galvin S, Sun TT. Differentiationrelated expression of a major 64K corneal keratin in vivo and in culture suggests limbal Location of corneal epithelial stem. Cell Biol1986;103(1):49 62
11白靓,周余来,成岩,等.兔角膜缘干细胞的研究进展.现代生物医学进展2007;10(7):1579
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