作者：杨洪滨
作者单位：（150001）中国黑龙江省哈尔滨市，哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院
【摘要】目的：研究冰片对家兔血眼屏障通透性的影响。
方法：将42只家兔随机分为实验组和对照组,每组21只。实验组给予冰片（0.8g/kg）灌胃，对照组等体积溶媒灌胃，给药后15min耳缘静脉注射20g/L伊文思蓝（EB），分别经5，15，30，45，60，90，120min取房水及玻璃体。采用荧光分光光度法检测房水及玻璃体中的EB浓度。
结果：与对照组相比，实验组房水和玻璃体中EB含量更高。
结论：冰片可提高家兔血眼屏障的通透性，是一种有效促进药物透过血眼屏障的穿透促进剂。这将为某些内眼疾病的药物治疗提供新方法。
关键词：冰片；血眼屏障；药物传递
【关键词】 冰片 血眼屏障 药物传递
0引言
药物通过血眼屏障进入眼内对治疗眼部自身免疫性疾病、退行性病变、青光眼[1]和炎症是必需的。一些分子量较大的水溶性药物局部及全身用药眼内通透性差，虽然玻璃体内注药可获得有效的治疗浓度，但此方法创伤大、风险高，易对眼内组织造成毒性作用。因此，优化药物处方增加药物的跨血眼屏障传递具有重要意义。冰片[2]又称龙脑，是小分子萜类物质（结构式见图1），分子量154.25，分为天然冰片和合成冰片两大类，可以内服亦可外用。冰片较少单独应用，常用作“引药及佐药”。国家药品处方中有大量的冰片配伍应用，例如复方丹参滴丸，珍视明滴眼液，苏合香丸等。现代药理学实验表明：冰片具有促进渗透及增加药物跨生理屏障传递的作用。冰片可以加速天麻甙在胃肠道的吸收，促进其透过血脑屏障进入脑组织。合成冰片可以增加磷酸川芎秦在小鼠血液及脑中的药物浓度。冰片及薄荷脑鼻内联合给药可显著促进眼镜蛇毒向脑内的传递。冰片还可以明显提高葛根素滴眼液在兔离体角膜的渗透性[36]。血眼屏障是血管中的药物进入眼内靶组织的主要生理屏障，主要包括血房水屏障和血视网膜屏障，对于血视神经屏障的存在尚存争议[7]。视网膜毛细血管内皮组织构成的血视网膜屏障内屏障与血脑屏障结构十分相似，由此我们提出一种假设：冰片能否增加血眼屏障的通透性，促进药物的跨膜传递。本研究采取合成冰片灌胃的给药方式，探讨其对兔血眼屏障通透性的影响作用。现将结果报道如下。
1材料和方法
1.1材料 仪器与试药：荧光分光光度计（岛津RF540）；合成冰片（广州黄埔化工厂），龙脑含量57.6%，符合2005版药典规定，将冰片研成粉末，溶于500mL/L乙醇中配制成200mL/L冰片溶液。伊文思蓝（Sigma公司），用生理盐水溶解伊文思蓝配制成20g/L溶液，振荡混匀，过滤后避光放入4℃冰箱备用。实验用水为重蒸水。三氯乙酸等其它试剂均为市售分析纯。实验动物健康白色家兔42只（哈尔滨医科大学第一临床医学院动物室提供），雌雄兼用，质量2.0～3.0kg。实验前经裂隙灯检查无眼疾者纳入实验。
1.2方法 将42只家兔随机分为两组：实验组及对照组。实验组及对照组按注药后5，15，30，45，60，90，120min时间点分为7个亚组。每亚组3只兔6眼。实验前夜禁食不禁水。实验组及对照组分别灌服冰片溶液（0.8g/kg）及等体积溶媒对照液。15min后由耳缘静脉注射20g/L伊文思蓝(2mL/kg)。每个亚组分别经5，15，30，45，60，90，120min后，静脉注射30g/L戊巴比妥钠（30mg/kg）麻醉兔子。即刻生理盐水冲洗结膜囊，用1mL一次性注射器从透明角膜处做前房穿刺抽取全部房水，用5mL一次性注射器从睫状体扁平部进针抽取全部玻璃体。谨慎操作，防止混入血液。每次更换新的注射器。校零标准品为50%（w/v）三氯乙酸按1∶3加入无水乙醇。使用校零标准品配制不同浓度(25～1000μg/L)的伊文思蓝标准溶液，测定其吸光度值，计算出标准曲线方程。取房水及玻璃体样品分别加入等量的50%(w/v)三氯乙酸 ,涡旋振荡混匀,将混合液15000r/min离心20min，取全部上清与3倍的无水乙醇混合。在Ex 620nm（激发波长）、Em 680nm（发射波长）条件下进行测定，检测各受试样品吸光度（A）值。依据标准曲线方程求得样品中伊文思蓝浓度，并计算每毫升房水及玻璃体内伊文思蓝的含量。
统计学处理：所有实验结果采用±s表示，所得数据用SPSS 16.0统计软件包进行统计分析，组间比较采用析因设计的方差分析，以P＜0.05为显著性标准。
2结果
2.1大体观察 注射伊文思蓝后见动物巩膜虹膜、皮肤及脚趾迅速变蓝，指示染料均匀分布。
2.2预实验结果 在预实验中，给予白兔冰片灌胃后注射荧光素钠，在不同时间点做裂隙灯前房照相，可以看到荧光物质在前房的渗漏（图2）。在注射伊文思蓝30min后将兔眼球摘除，用锡纸包裹，置于70℃低温冰箱中，冷藏。48h后取出冠状面切开玻璃体可见玻璃体内呈现轻微蓝染。
2.3伊文思蓝的标准曲线方程 y=18.92x948.22，R2=0.9994（n=9）,其中y为受检溶液伊文思蓝的浓度。
2.4家兔房水及玻璃体中伊文思蓝含量 对照组及实验组家兔房水中不同时间点的伊文思蓝质量浓度(表1)，玻璃体中不同时间点的伊文思蓝质量浓度(表2)。
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