作者：张瑜
作者单位：（200040）中国上海市复旦大学附属华山医院眼科
【摘要】目的：观察exendin4类似物ip对链脲佐菌素( STZ)造模大鼠的血糖和ERG的影响。
方法：SD大鼠36只被分成3组:正常组8只、糖尿病每日ip注射生理盐水组8只和exendin4类似物0.05μg/g治疗组20只。检测exendin4类似物注射期间血糖水平,糖尿病病程1mo和3mo时ERG和OPs的表现。
结果：STZ造模大鼠连续exendin4类似物注射期间平均血糖和正常组差异无统计学意义（P>0.05）;而与注射用水组比较血糖明显降低（P<0.05）;糖尿病大鼠ERG的b波、OPs振幅随病程进展有下降趋势，且潜伏期延长；exendin4类似物治疗组的下降幅度明显小于注射用水组，统计学有差异(P<0.05)。
结论：Exendin4类似物对STZ造模大鼠有降低血糖的作用,而且可改善糖尿病大鼠ERG表现。
关键词：高血糖；视网膜电图；视网膜病变；exendin4类假物
【关键词】 高血糖 视网膜电图 视网膜病变 exendin4类假物
0引言
糖尿病性视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是一种最常见的糖尿病微血管病变。临床研究发现：在II型糖尿病的患者中DR的发病率为33.4%[1]。随着我国糖尿病患者的增加，DR将是我国未来防盲治盲的重点。β细胞不能分泌足量的胰岛素来维持正常的血糖水平是糖尿病的发病机制之一,目前的治疗手段不能从根本上有效地控制血糖、防止并发症的发生,并且不能逆转持续的β细胞功能减退。1992年,Nathan等[1]首次报道胰升糖素样肽1(GLP1)具有促进β细胞增生、降低血糖的作用,但其过短的半衰期(2～6min)限制了它的应用。
Exendin4是一种从蜥蜴唾液腺中提取的GLP1类似物,其半衰期为60～70min。Greig等研究发现,快速予以exendin4 0.4nmol/kg可增加Wistar大鼠的胰岛素分泌量,是同等剂量GLP1的2倍;exendin4和GLP1半数有效量( ED50)的值分别为0.0143和0.19nmol/kg ,因此认为exendin4的作用较GLP1强10倍。我们采用的Exendin4类似物是由基因工程制取的多肽，在动物实验中具备与之相同的降血糖等作用，已进入糖尿病治疗的Ⅲ期临床试验，制作成本大为降低，有利于推广使用。闪光视网膜电图(eleetroretinogram，ERG)是由光照引起视网膜各种神经元电活动的综合反应，是从视网膜的细胞水平来评价视功能的。ERG的检查可用于对DR高危人群的监测及对DR治疗效果的观察，是DR的一项敏感监测指标，其中最具意义的是ERG的亚成分视网膜振荡电位(oscillatory potentials，OPs)。我们拟观察exendin4类似物对正常进食的链脲佐菌素(STZ) 造模糖尿病大鼠血糖、质量的影响和ERG b波、OPs的变化情况，观察其对视网膜是否有保护作用。
1材料和方法
1.1材料 二级雄性SD大鼠40只，质量160～180g。饲养条件：室温18～25℃，空气流通，相对湿度55％～70％ ，12h光照维持，昼夜循环。动物自由摄食饮水。STZ由美国Sigma公司生产。Exendin4类似物由中科院上海生物工程研究中心孙玉昆教授提供。
1.2方法 将STZ溶于0.1mol/L、pH=4.5的枸橼酸、枸橼酸钠缓冲液中，质量浓度为20g/L，用时配制，按60mg/kg行大鼠ip，共造模32只。其余8只以等量生理盐水ip。24h后断尾取血，测定血糖，连续3d空腹血糖≥15mmol/L者纳入糖尿病大鼠组，共28只。4只造模不成功的大鼠舍弃。将糖尿病大鼠28只设为实验组，exendin4类似物0.05μg/g 20只，8只设为对照组，未行STZ造模的8只大鼠作为正常组。1mo每天测血糖，后每周称1次质量，以观察质量等变化。分别于造模后第1，3mo对所存活大鼠行视觉电生理检测。检查前用20g/L戊巴比妥钠按对照组50mg/kg、观察组35mg/kg ip麻醉，托比卡胺滴眼液充分散瞳，倍诺喜滴眼液表面麻醉，动物暗适应30min，将实验鼠放在特定支架上，鼠眼距刺激器背景光源30cm。参照Hotta的方法接通电极，按ISCEV标准记录FERG(包括OPs)。视觉电生理仪为日本TOMEY EP1000型视觉电生理仪。FERG, OPs为白色闪光刺激，闪光强度3cd·s／m2 ，闪光间隔为15s。通频带0.1～500Hz，扫描时间250ms，叠加次数3次。暗红光下安放角膜电极、参考电极与接地电极，分别置于动物角膜、外眦皮下、右脚掌上。当双眼电极的电阻小于4Ω后开始刺激程序，记录视网膜最大反应a、b波峰潜时、振幅及最大的3个OPs振幅的总和。a波峰潜时为刺激开始到a波波谷的时间，振幅为基线到波谷的电位值；b波峰潜时为刺激开始到b波波峰的时间，振幅为a波波谷到b波波峰的电位值；OPs各子波(以3个子波多见)峰潜时为刺激开始到各子波波峰的时间，振幅为各子波上一波谷到各子波波峰的电位值；OPs总振幅为OP1，OP2 ，OP3各子波振幅之和。
统计学处理： 用SPSS 10.0 for windows软件包进行统计分析。
2结果
2.1 Exendin4类似物对STZ糖尿病大鼠血糖和质量的影响 STZ造模后，糖尿病组大鼠血糖显著升高，表示造模成功。予分组分别给予注射用水和exendin4类似物治疗后，注射用水组的血糖未见下降，而exendin4类似物治疗组血糖明显下降，两组相比差异具有显著性（P<0.05）；而exendin4类似物治疗组和正常组大鼠的血糖无显著性差异（P>0.05，图1）实验各组大鼠质量无差别，各组差异无显著性。
2.2 Exendin4类似物对FERG b波振幅和OPs总振幅的影响 糖尿病造模成功大鼠1mo和3mo时FERG的b波振幅与正常组相比明显降低，两者有显著性差异（P<0.05），Exendin4类似物治疗组较糖尿病未用药组降低程度较小，差异具有显著性（P<0.05,图2）。糖尿病造模成功大鼠随病程进展FERG的OPs总振幅与正常组相比明显降低，两者有显著性差异（P<0.05），Exendin4类似物治疗组1mo时较糖尿病未用药组降低程度较小，差异具有显著性（P<0.05）；3mo时两者降低程度相当，两者无统计学意义(图3)。
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