作者：周跃华等来源：眼科 1998年第2期第8卷
准分子激光位角膜磨镶术治疗近视的角膜地形图分析
眼科 1998年第2期第8卷 临床研究
作者：周跃华 李志辉 孙葆忱
摘 要 从动物实验角度对细菌性角膜溃疡氧自由基与活性胶原酶生成关系进行了观察，结果表明：角膜溃疡后组织中氧自由基产生明显的升高，同时活性胶原酶也高。而经抗氧化治疗后，随氧自由基清除的程度，组织中活性胶原酶的生成也不同程度下降，表现氧自由基的产生与活性胶原酶生成呈正相关（r＝0.9956，p＝0.0044）；并通过潜酶活化比较，表明抗氧化治疗后组织中部分潜酶未能活化，说明在体内氧自由基确实参与胶原酶潜酶的活化。
分类号 R772.21
A correlative study of active oxygen and active collagenase in corneal ulceration／Wang Yi…／／Ophthalmol CHN.-1998，7（2）．-119～122（Department of Ophthalmology，Southwestern Hospital，3rd Military Medical University，Chongqing 400038）
This study is to explore the relation between oxygen free radicals and collagenase activation in corneal ulcer.The model of pseudomonas aeruginosa corneal ulcer in rabbits was adopted.The level of malondialdehyde（MDA） and the collagenolytic activity in the cornea were observed after treated with antioxidants．Results showed that both MDA level and collagenolytic activity in the cornea decreased signficantly after treated with antioxidants，and they showed parallel relation（r＝0.9956）.The collagenolytic activity of the treated group with SOD＋CAT，when APMA was added，was significantly higher than that of the group without APMA.However，the collagenolytic activity of the control with APMA or without APMA had no significant difference. The activation of latent collagenase is closely linked to oxygen free radicals by PMNs generated.
Subject terms Cornea ulcer；Collagenase Antioxidants
研究表明，无论是组织细胞或多核白细胞均以潜酶（latent collagenase）形式分泌或释放胶原酶［1，2］。因此，胶原酶被释放后必然有一活化过程，而这一活化机制仍不清楚，迄今对其活化的体外生化研究至少提出了4种可能的机制，即蛋白水解、构型变化、巯基转换以及氧化活化［3-9］，然而这些研究均在体外进行，动物实验研究仍未见报道，本研究从动物实验的角度，采用兔绿脓杆菌性角膜溃疡为模型，观察角膜溃疡活性氧的产生与胶原酶活化的相关性。
1 材料与方法
1.1 动物选择及模型制作
选用大白兔，体重2～2.5kg。全麻后，0.5％的卡因滴双眼三次，用5mm直径角膜环钻于角膜中央钻痕。固定眼球，4号皮试针自上方钻痕缘浅层潜行进入角膜中央，缓慢注射铜绿色假单孢菌悬液50μl（107个／ml）。
1.2 分组、治疗及取材
随机分组，每组7只兔。A组：对照组，以0.9％生理盐水滴眼；B组：SOD＋CAT混合液滴眼（SOD 1500u／ml，CAT 2000u／ml）；C组：1％茶多酚液滴眼；D组：2.5％维生素C液滴眼，维生素E肌注50mg／只*日.均在模型制作后立即开始治疗，每日滴眼6次，治疗十天后处死动物，各组切取角膜组织。
1.3 组织处理及测定指标
1.3.1 组织处理 取全角膜，剪碎后加入冰冷的0.1MTris—HCl缓冲液（pH7.6，含0.4MNaCl，0.01MCaCl2）0.8ml中，组织匀浆机间断匀浆4次，每次20秒（冰水浴条件下），4℃，10000rpm，10分钟，取上清液测定各指标及蛋白定量。
1.3.2 测定指标 ①丙二醛（MDA）测定，采用荧光光度法。具体步骤参见文献［10］。②胶原酶活性的测定：利用50％的二恶烷可沉淀未变性的胶原，而不能沉淀变性的胶原为原理，按照Terato K［11］的方法将酶-底物作用后的变性与未变性胶原分离，测定上清中羟脯氨酸的含量，反映上清中存在的被水解的胶原量，也代表了胶原酶的活性。③蛋白质浓度测定：采用Lowry法。
2 结果
2.1 抗氧化治疗对丙二醛（MDA）含量及胶原酶活性影响
经不同的抗氧化剂治疗后各组角膜组织中MDA的含量及胶原酶活性均显著低于未治疗组（p＜0.05）；MDA含量与胶原酶活性呈正相关，相关系数r＝0.9956，p＝0.0044。各治疗组间，B组与C组间无显著性差异（p＞0.05），而D组的MDA含量及胶原酶活性则均显著高于B、C组（p＜0.05）。对照组羟脯氨酸（Hydro-xyproline） 含量在加APMA与未加APMA比较，无明显差异（p＞0.05）；而B组加入APMA（4-乙酸氨基苯汞，胶原酶潜酶活化）后羟脯氨酸含量显著高于未加APMA（p＜0.05），但仍显著低于对照组（p＜0.05）。（见附表及图1，2）。
*APMA：4-乙酸氨基苯汞，胶原酶潜酶活化
图1 抗氧化治疗对MDA含量及胶原酶活性影响
图2 胶原酶活性与MDA含量相关关系
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