表1  不同处理组角膜植片发生严重排斥反应的时间  (RV>7，±s)

    3.2  角膜移植前后各治疗组外周血T细胞亚群的变化  在角膜移植前3天，后15天两时间点比较各治疗组外周血T细胞亚群的变化时，发现CD4+细胞的百分数变化各组间差别无统计学意义，CD8+细胞的百分数变化各治疗组明显低于对照组，而联合用药组又明显低于CsA或雷公藤单独给药组。IL-2R+细胞百分数变化各治疗组也明显低于对照组，它们的差别均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

    表2  角膜移植后各治疗组间外周血T细胞亚群变化（X1-X2）%的比较  (±s)

    #    Note: The changes of CD8+ cell：2，3 and 4 VS. 1，*P＜0.05; 4 VS.2 or3，**P＜0.05.The change of IL-2R+ cell 2，3 and 4 VS. 1，#P＜0.05.

    3.3  角膜移植后植片的免疫组化观察  各治疗组术后15天植片中淋巴细胞浸润均明显少于对照组，其中联合用药组和CsA组又少于雷公藤内酯组，从浸润植片中T细胞亚群的比例来看，对照组CD4+ :CD8+ :IL-2R+ :Ia+均在1.2:1:1:1，而雷公藤内酯组则以CD4+和Ia+细胞浸润为主，联合用药组浸润淋巴细胞略少于CsA组类似于术后第8天时对照组的情况，植片中主要为少量的Ia+细胞（见图2）。

    Note:A.Normal，B.Control，C.Triptolide，D.CsA，E.Triptolidet+CsA.

    图2  各治疗组术后15天植片中淋巴细胞浸润情况

    4  讨论

    1979年，Coster等用CsA延长了同种角膜移植植片的存活期。这样CsA作为无骨髓毒性、有选择性地抑制Th细胞活化的免疫抑制剂，成为目前临床上最常用的抗排斥药物之一。许多器官移植的成功显然与其应用密不可分，但仍存在疗效有限和因免疫功能的抑制易导致感染、肿瘤的发生，长期使用还会造成肝、肾和骨髓损害及代谢紊乱等［3］。近年来，已证明雷公藤具有免疫抑制作用，用于器官移植可降低慢排斥反应发生率。此外，其还有一定的抗菌、抗肿瘤作用，但其使用剂量过大时，也会出现严重的毒副作用如心、肝、肾和生殖等组织器官的损害［4，5］。

    我们选用雷公藤内酯和CsA联合用药基于CsA可抑制正常淋巴细胞中多种淋巴因子的mRNA转录但不抑制IL-2R合成和T细胞受体识别抗原，并对经细胞膜的信号转导无作用，而雷公藤主要是抑制Th细胞的增殖，同时抑制Th细胞产生IL-2而影响Tc细胞分化增殖并明显抑制丝裂原或抗原刺激下的淋巴细胞表面IL-2R表达［6］。由此说明雷公藤和CsA在作用机制上可以互补。本实验在角膜移植术后注射15mg/kg体重组临床疗效明显，血中Th/i细胞变化不大，角膜免疫组化片中浸润淋巴细胞Th/i细胞比例相对略低。血和角膜组化片中Tc/s和IL-2R+细胞比例也均较低，进一步表明CsA比雷公藤内酯有更突出的抑制Th/i细胞作用。雷公藤内酯组，在角膜移植术后的大鼠血中有IL-2R表达受抑制阶段，角膜组化片中IL-2R+细胞有一定的减少。而10mg/kg CsA和100μg/kg雷公藤内酯组，在降低1/3 CsA用量的情况下仍然能达到标准CsA用量的疗效，这说明雷公藤内酯和CsA有协同作用。

    据报道，以200～400μg/kg剂量给大鼠注射雷公藤内酯，每天1次连用10天，其血红蛋白、血小板、谷丙转氨酶及尿素氮等均无明显影响。我们也曾对大鼠按100μg/kg注射雷公藤内酯，每天1次连用30天，光镜下观察未见肝肾损害。因此，在此剂量应用雷公藤内酯与CsA联合用药，雷公藤内酯无明显的毒副作用，而抗排斥的疗效却显著增加，同时也可弥补CsA的长期使用有可能出现的细菌感染和易导致肿瘤的发生之不足。我们认为雷公藤内酯和CsA联合用药如应用到临床，应不失为一种较好的防治移植排斥的方法。

    【参考文献】

    1  王晶，陶纪值，丁伟，等.T细胞疫苗接种抗异种角膜移植排斥反应的实验研究.解放军医学杂志，1998，23（1）：45-47.

    2  Holland EJ. Clinic and immunohistologic studies of corneal rejection in the rat penetrating keratoplasty model. Cornea， 1991，10(5):375-380.

    3  Pen I. Cancer after cyclosporine therapy. Transp Proc， 1988，20(suppl):276.

    4  Chen H， Chang X， Weng T， et al. A study of microemulsion systems for transdermal delivery of triptolide. J Control Release，2004，98(3):427-436.

    5  Fidler JM， Li K， Chung C， et al. PG490-88， a derivative of triptolide， causes tumor regression and sensitizes tumors to chemotherapy. Mol Cancer Ther，2003 ，2(9):855-862.

    6  Yang SX， Gan HL， Xie SS， et al. Immunosuppression of triptolide and its effect on skin allograft surrival. Int J Immunopharmacol，1992，14(6):164.

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