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2结果
2.1视网膜铺片
视网膜铺片检查显示对照组（图1A）和实验组（图1B）均成功建立了OIR模型，表现为视盘周围的后极部血管闭塞，呈现无灌注区，周边部血管灌注大致正常，RNV主要发生于两者交界处。与对照组相比，实验组血管无灌注区范围更大，分别为(28.0±6.7)%和(39.0±8.9)%，两组差异有统计学意义（P<0.05），提示sTieFc加重了OIR的缺血过程。
2.2免疫组织化学染色
血管内皮细胞的免疫组织化学染色显示对照组有大量的RNV突破视网膜内界膜向玻璃体腔内生长（图2A白箭头所示），而实验组（图2B）玻璃体腔侧的RNV明显减少，玻璃体腔侧几乎无RNV染色，内皮细胞核计数分别为77±19和35±11，两组差异有统计学意义（P<0.05），提示sTieFc抑制了RNV的发展。
3讨论
早在1948年，Michaelson就提出缺血的视网膜能够释放某种因子刺激RNV形成的假说[10]，这种假说在半个世纪之后的今天得到证实。目前，已有多种血管新生促进因子的功能得到确认，包括碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblast growth factor, bFGF）、胰岛素样生长因子(insulinlike growth factor, IGF)、VEGF、血管生成素、血小板源性生长因子（plateletderived growth factor, PDGF）、肿瘤坏死因子以及白细胞介素等，其中VEGF被认为是最重要的血管新生促进因子[11,12]。除VEGF受体系统之外，血管生成素Tie2系统在体内各种血管新生过程中的重要作用逐渐受到重视。Ang1的基因敲除小鼠在胚胎形成时期血管不能发育成熟，超微结构显示血管内皮细胞不能与周细胞相结合[13]，因此Ang1可以促进血管内皮细胞和周细胞相互作用，而这是血管成熟的必要因素。相反，过量表达Ang2的转基因小鼠与Ang1基因敲除鼠的表现相似，说明Ang2的作用与Ang1相反[3]。实际上Ang2是Ang1天然的拮抗剂，与血管内皮细胞上Tie2结合后并不引起受体的磷酸化，竞争阻断Ang1的生理作用[3]。有研究结果显示，在小鼠视网膜血管发育和血管新生的过程中Ang2 mRNA表达上调，表现与VEGF极为类似[14]；缺氧状态和VEGF可以上调Ang2的表达，进而促进内皮细胞增殖、出芽、移行，基底膜降解，利于新生血管的形成[15,16]。眼部新生血管的研究显示，手术摘除的CNV膜中Ang1，Ang2和Tie2表达明显[4]，而阻断Tie2的作用可以抑制实验性视网膜新生血管的发展[5]。我们通过建立OIR模型，以玻璃体腔内注射sTieFc阻断Tie2的作用，结果RNV发展受到明显的抑制，表明血管生成素Tie2系统在RNV发展过程中的重要作用，同时证明了拮抗Tie2可以抑制RNV发展，为抗Tie2生物学治疗在眼科领域的应用提供了线索和依据，给DR与其他难治性新生血管性眼病的治疗带来新的希望。
虽然sTieFc成功抑制了实验性RNV的发展，但是我们的研究还表明sTieFc加重了视网膜的缺血状态，表现为治疗眼无灌注区面积的扩大了39.3%。DR，缺血型视网膜静脉阻塞以及早产儿视网膜病变等RNV性眼疾均伴有视网膜的缺血状态，理想的治疗方法应该是既能抑制RNV，又能促进无灌注区的正常血管化，而这两个过程在某种程度上是矛盾的。与本研究结果类似，我们的另一项研究（尚未发表）表明应用VEGF受体2单克隆抗体阻断VEGF的作用在抑制实验性RNV的发展的同时，使视网膜缺血加重58.6%，这些数据提示完全阻断某种血管新生促进因子也许并不是这类疾病最恰当的治疗方法，因为缺血性视网膜病变无灌注区的正常血管化可能也需要这种血管新生促进因子发挥作用。近来越来越多的研究开始着眼于促进缺血性视网膜病变无灌注区的正常血管化，例如有研究证实肿瘤坏死因子α能够在抑制RNV的同时恢复缺血性视网膜病的血管化[17]，这些研究的实质在于重新建立血管新生促进因子和抑制因子之间的平衡，把缺血性视网膜病变和RNV的治疗带进一个新的阶段。由于血管新生是一个极其复杂的过程，众多因子参与其中，若想在抑制RNV与促进正常血管化之间达到精确的平衡仍需进一步研究。
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