作者：顾静 周大兴 陈安平 朱晓燕 王晶 钱艳鑫
【关键词】 白内障；亚硒酸钠；大鼠；晶状体；Fs1272滴眼液
Abstract: ［Objective］ To study the preventive and therapeutic effect of FS1272 eye drops on cataract induced by Sodium selenite. ［Methods］ With the crystalline lens culture method in vitro, the influence of FS1272 eye drops on the cataract crystalline lens of rat induced by Sodium selenite was observed,including the extent of the rat crystalline lens opaque,the activities of superoxide dismutase(SOD)，tathion peroxidase(GSHPX),catalase(CAT)，the quantities of malondialdehyde (MDA ),soluble protein(WSP) and insoluble protein(WIP) in lens.［Results］The extent of the crystalline lens opaque in high and middle dose group of FS1272 eye.
Key words： cataract; Sodium selenite; rats; crystalline
随着人们生活水平的提高和寿龄的延长，白内障(Cataract)已经成为目前世界性的首位致盲因素,同时也是我国第一位的致盲眼病［1］，而老年性白内障(Sinile Cataract, 简称SC)是最常见的白内障，在眼科为常见病、多发病，严重影响老年人的日常生活和质量［23］。目前还没有令人满意的防治白内障药物,因此寻找经济高效安全的防治白内障的新药依然是眼科医学研究的重点课题。我们采用亚硒酸钠［47］体外诱发大鼠白内障模型来模拟老年性白内障。观察大鼠晶状体的混浊程度变化，测定大鼠晶状体SOD、CAT、PSHPx等抗氧化酶活性、氧化产物MDA以及WSP和WIP的含量［89］，旨在探讨新药FS1272滴眼液对抗白内障的作用及其机理，为临床预防和治疗白内障提供确凿的实验依据。
1 材料
1.1 实验动物
Wistar雌性大鼠140只，体重80100克，由浙江中医药大学动物中心提供。
1.2 药品
FS1272干粉（属于多肽类物质，上海新药开发中心，批号060427），白内停滴眼液（武汉远大制药集团有限公司，批号060408），莎普爱思滴眼液（浙江平湖莎普爱思制药有限公司，批号060105）。
1.3 主要试剂
亚硒酸钠（天津市天达净化材料精细化工厂，批号060410）；M199干粉（美国GiBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司，批号060328）；MDA、SOD、GSHPX、CAT、考马斯亮兰试剂（南京建成生物工程研究所，批号060523）；其它试剂均为国产分析纯产品。
2 实验方法
2.1 培养液的制备与实验分组
在M199无血清培养液的基础上另加相应成分（胎牛血清除外），配成空白对照组、模型组、FS1272高剂量组、FS1272中剂量组、FS1272低剂量组、白内停组、莎普爱思组7种不同的培养液，完全溶解再过滤除菌，之后，加入已灭活过的胎牛血清使之最终浓度至10％；4℃冰箱分装保存。
2.2 新鲜完整晶状体的制备
颈椎脱臼法处死大鼠，迅速取出眼球，洗净，剔除肌肉等组织，75％乙醇冲洗，青链霉素溶液（80万u/L）冲洗两次,将晶状体放入装有37℃预热过的M199无血清培养液的青霉素小瓶中。在无菌室中超静台上用抗生素溶液清洗眼球，眼科剪由后路剪开眼球后壁，将巩膜向两侧分开，剥离晶状体，去净玻璃体，用M199无血清培养液冲洗两次，将晶状体后极向下，置入含M199有血清培养液1.5ml的24孔板中，每孔一枚。将24孔板置于37℃、5％培养箱中培养8h后，选取透明晶状体备用。
2.3 分组、给药、培养
将晶状体随机分为7组，分别放入上述7组含有不同培养液的培养板中。于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，每24h更换1次培养液；于培养的24h、48h、72h后观察晶状体混浊度，最后一次观察后检测晶状体相关生化指标。
2.4 晶体混浊度观察与记录
培养24h、48h、72h后在倒置显微镜下各观察一次，记录晶体混浊情况，同时用尼康4500数码相机照相。晶体混浊度参照张家萍等［10］的标准分级，Ⅰ：晶体无混浊；Ⅱ：晶体轻度混浊，周边出现空泡；Ⅲ：晶体中度混浊，周边空泡向中心扩展，中心核出现雾状混浊；Ⅳ:晶体高度混浊，空泡扩展到核区，中心核雾状混浊加重；Ⅴ:晶体核混浊，白内障成熟。
2.5 晶体生化指标测定
取出培养3d后的各组晶状体,将每个晶体吸干水分，称重，立即将各晶体放入匀浆管内，加入适量生理盐水，冰浴下充分研磨5min制成10%的晶体匀浆，备用。测定时将每组晶体分成两部分，一部分测定SOD、CAT、MDA；另一部分测定GSHPX、WSP、WIP。严格按照试剂盒所示方法测定其含量。
[1] [2] 下一页 |
