作者：王元贵,柯显培,黄新民,王佐祥
作者单位：1(518029)中国广东省深圳市,武警广东边防总队医院眼科; 2(650000)中国云南省昆明市,武警云南总队医院眼科;3(518116)中国广东省深圳市第九人民医院眼科
【摘要】目的:观察家兔视神经切断后再生改变。方法:采用硫喷妥钠腹腔内注射联合球后20g/L奴夫卡因溶液注射麻醉，剪开球结膜用视神经钳分离视神经，用显微手术剪将视神经2/3切断，30d后手术取出视神经，进行病理染色检查。结果:实验30眼有28眼再生，视神经切断处间隙被再生的视神经纤维长满接通，再生的视神经纤维比正常的粗大，排列不整齐，呈条索状。结论:视神经损伤是可再生的，其再生形式从切口两侧缘开始，而不像周围神经那样从近端开始向远端再生。
【关键词】 视神经切断；视神经再生；动物实验
Experimental study on the regeneration of optic nerve after neurotomy in rabbit
YuanGui Wang, XianPei Ke, XinMin Huang, ZuoXiang Wang
1Department of Ophthalmology, Guangdong Provincial Frontier Defence General Hospital of Armed Police, Shenzhen 518029, Guangdong Province, China; 2 Department of Ophthalmology, Yunnan General Hospital of Armed Police, Kunming 650000, Yunnan Province, China; 3 Department of Ophthalmology, the Ninth Peoples Hospital of Shenzhen City, Shenzhen 518116, Guangdong Province, China
Correspondence to:YuanGui Wang. Department of Ophthalmology, Guangdong Provincial Frontier Defence General Hospital of Armed Police, Shenzhen 518029, Guangdong Province, China. [email protected]
AbstractAIM: To observe regeneration of rabbit optic nerve after axotomy.METHODS: Optic nerve was separated by clipper after injecting sodium pentothal intraperitoneaiiy associating with retrobuibar injection of 20g/L novocaine. 2/3 optic nerve was excised by microsurgical scissors. On postoperative 30 days, optic nerve was taken and undergone pathological staining test.
RESULTS: Regeneration happened in 28 eyes of all the 30 eyes. Nerve fibers overgrew in the blank of excised optic nerve. Regenerated nerve fibers were more coarse and disordered than normal nerve fibers. CONCLUSION: Impaired optic nerve can regenerate. It happens from two sides of incision, instead of growth from proximate to disal end like peripheral nerve.
KEYWORDS:optic nerve;regeneration; axotomy;animal
experiment
0引言
无论平时还是战时,眼球顿挫伤视神经损伤,临床不及时有效的对症治疗,视神经细胞变性凋亡,视神经难以修复[1],为了进一步了解视神经在受到外伤的情况下病理生理的改变,我们于2001/2003用中国家兔进行视神经切断再生实验。本文重点将30只兔眼的实验情况及探讨予以介绍。
1材料和方法
1.1材料
采用广东地区中国家兔30只，年龄均为8mo。雄性15只，雌性15只，颜色不一，体质量1600~2700g。
1.2方法
常规消毒。麻醉：硫喷妥钠，50mg/kg腹腔注射，20g/L奴夫卡因溶液球后注射。从3∶00~9∶00球结膜剪开，剥离。露出上直肌,穿线,剪断。再剥离至球后，露出视神经，用斜视钩钩住视神经。此时轻提斜视钩，视神经纤维、鞘膜、周围组织等境界分明。用15号三角刀片，在离球后2~4mm切断视神经横径2/3，不损伤周围组织。术后，球后放入少量外用磺胺粉剂，缝合上直肌、球结膜。在观察期间局部及全身不用抗生素。术后30d第2次手术，剪开球结膜，剥离。穿标记线，在离视神经3mm穿入球内，从角巩膜缘12∶00处穿出，打结。剪除角膜，沿标记线向球后剪开巩膜，留一个视神经宽度的巩膜带和视神经相连，取视神经时，我们用眼科普通弯剪，紧贴视神经孔处剪断。取下后剪断巩膜条带。把视神经周围组织剪除干净。巩膜标记为上方。为防止视神经在固定液内扭曲，把视神经伸直，贴伏在擦镜纸上，稍干后放入适量40g/L甲醛固定液内。常温保存30d后制成蜡块切片。由于有巩膜做标记，在包埋时，能分清上、下、远、近端。切片时沿神经垂直轴切，切出的片子，能分清切断和未切断的部分。每条视神经切片都做3种染色法：（1）HE染色；（2）髓鞘染色法（Mahan）化；（3）神经纤维染色法(Bielshowsliyi，比肖基化法）。切片厚度：HE染色法5μm，视神经纤维染色法10μm，髓鞘染色法15μm。固定标本时间，可灵活掌握。
2结果
实验观察家兔共30只，切断两眼视神经15只，共观察视神经30条，其中有视神经再生者28条。再生视神经有3种情况：（1）视神经切断处的间隙被再生的视神经纤维长满接通。部分切断侧面附近再生的视神经纤维较未切断侧数量多，向近端逐渐减少，到视神经孔附近的一端，就是正常的视神经纤维。再生的视神经纤维比正常的粗大，排列不整齐，有的呈条索状。HE染色，髓鞘染色，视神经纤维染色均较正常染色深。（2）再生的视神经纤维排列整齐，向切口间隙生长，其中央部有再生的视神经纤维通过切口间隙部分接通。此例是视神经纤维完全切断，鞘膜未切断，鞘膜向切口间隙内陷。（3）再生的视神经纤维比正常视神经粗，伴有较多的胶质增生。从有的片子中看到，再生的视神经纤维开始呈枝芽状，从切断间隙两侧缘向切口生长,有的段呈条索状接通。
3讨论
视神经是视路从视乳头至视交叉的一段，由视网膜神经节细胞所发出的轴索汇集而成。在组织学上视神经与脊髓中白质相似，神经表面没有雪旺（Sohwan）氏神经膜，但有髓鞘存在[2]。以往认为不是一般的周围神经、而是中枢神经系中的一个束，损伤后不能再生[3]。视神经切断再生实验，1982年已有报道，有人把青蛙的视神经切断，3mo内，视神经再生，视力和以前一样好[4]。1985年Aguayo动物实验，人为损伤大鼠的部分视网膜，将其自体坐骨神经移植在此部分，并且注入HRP酶，观察到视网膜视神经细胞伸入了被移植的坐骨神经内。1987年Vidal等[5]动物实验，切断白鼠全层视神经，把其坐骨神经移植在其段断端，可看到视网膜视神经节细胞生长轴索内周围神经损伤后，溃变过程14~21d，再生过程10～14d，溃变和再生过程最长时间约35d。因此本组家兔眼视神经切断后，第2次手术取材时间、距第1次切断视神经30d。在光学显微镜下观察，看到再生的视神经纤维。这说明视神经在再生时间过程和周围神经大致相仿。家兔眼视神经切断后能够再生，说明雪旺氏神经膜并不是再生不可缺的神经膜。再生的重要条件是实验区段的毛细血管要扩张、充血、伴有较多的新生毛细血管供应营养。在没有再生的视神经片子中看到的毛细血管闭塞、萎缩。
我们用5只兔，行两眼视神经完全切断，做生活观察。兔的饮水、饮食，进出窝自如。当把兔换个新的环境，饮食、饮水，行走呈现目盲状态。60d后视神经开始萎缩，70d后萎缩已很明显，像有些青光眼杯，杯底用10D~15D看清。视神经完全切断后，两眼瞳孔仍有直接对光反射，较切断前反应迟钝。部分切断的兔眼瞳孔直接对光反射，开始迟钝，以后逐渐接近正常反应。
【参考文献】
1徐召溪,武明媚,焦西英,等.依托咪酯对成年大鼠视神经切断后视网膜神经节细胞的保护作用.国际眼科杂志2007;7(4):941944
2姜文敏,唐罗生.视神经再生的相关因素研究.国际眼科杂志2005;5(3):543546
3毕华德.眼科全书.北京：人民卫生出版社1965:225
4宋安群.生物进化的根本原因之我见.人才杂志1982;6:8
5所敬.视神经纤维再生.日本眼科1990;32:1437 |
