作者：李娟娟,张美霞
作者单位：（610041）中国四川省成都市，四川大学华西医院眼科
【摘要】目的：建立视网膜静脉阻塞诱导新生血管生成的动物模型，为视网膜新生血管性疾病的研究提供条件。方法：健康成年SD大鼠50只，常规麻醉后，尾静脉注射虎红，532nm激光光凝视网膜主要静脉，建立视网膜新生血管动物模型。光凝术后2wk，采用心内注射FITCdextran，视网膜铺片法观察新生血管生成的情况。结果：光凝手术时，可见视网膜静脉内明显黑色血栓形成。光凝后第2d发现视网膜主要静脉迂曲粗大、可见栓塞引起出血。2wk后FITCdextran心内灌注视网膜铺片显示光凝眼视网膜血管形态和分布发生明显改变，失去正常的放射状和网状结构，出现大量新生血管芽和新生血管枝，视网膜血管杂乱、荧光素渗漏。结论：成功的构建了光动力诱导视网膜静脉阻塞的动物模型，并使用FITCdextran心内灌注视网膜铺片对视网膜血管进行造影，从整体显示视网膜血管和新生血管的形态。该模型稳定性和重复性好，是研究视网膜新生血管的较为理想的动物模型。
【关键词】 视网膜新生血管；动物模型；FITCdextran心内灌注视网膜铺片
Laserinduced model of retinal neovaxcularization in rats
JuanJuan Li, MeiXia Zhang
Foundation item: National Natural Science Foundation of China (No. 30500547)
Department of Ophthalmology, West China Hospital, Medical School of Sichuan University, Chengdu 610041, China
Correspondence to: MeiXia Zhang. Department of Ophthalmology, West China Hospital, Medical School of Sichuan University, Chengdu 610041, China. zhang[email protected]
AbstractAIM: To establish construction laserinduced retinopathy animal model and to provide the basis for further studying on retinal neovascularization.
METHODS: Anesthetized fifty SD rats were injected of Rose Bengal by tail vein injection. 532nm laser photocoagulation was given to the retinal vein. Two weeks after transfection, the neovessels were observed by FITCdextran retinal angiography.RESULTS: During the photocoagulation, we found black thrombogenesis in the retinal vein, distant vein expand. The day after photocoagulation, we examined the rat fundus and found that retinal vein expand greatly. Two weeks after transfection, large part of neovascularization and FITC leakage in the group of coagulation could be observed by FITCdextran retinal angiography. Those in the group of blank intervention retinal vessel were normal.CONCLUSION: Laserinduced retinopathy animal model is an useful model in the study of the neovascular retinopathy.
KEYWORDS: retinal neovascularization; animal model; FITCdextran angiography
0引言
眼部疾病中，血管增生过度是一大类致盲性眼病的根本原因，其中视网膜新生血管性疾病占据较大比例。视网膜新生血管的生长及其所致的出血、渗出、增生等是多种致盲眼病的主要病理过程。理想的动物模型是研究视网膜新生血管生成、发展、转归的重要基础，本研究采用光动力法诱导大鼠视网膜静脉阻塞，建立视网膜新生血管的动物模型。
1材料和方法
1.1材料
SD大鼠50只（周龄4wk，体质量约250g）由四川大学华西动物实验中心提供。戊巴比妥钠是上海采购供应站产品，虎红是上海试剂三厂产品，FITCdextran是美国Sigma公司产品。Visual 532激光机、眼底照相仪系德国Zeiss公司生产，荧光显微镜由日本Olympus公司生产。
1.2方法
1.2.1配制15g/L戊巴比妥钠和20g/L虎红溶液
称取戊巴比妥钠0.3g，溶解于10mL生理盐水中，用前稀释成15g/L。称取虎红0.2g，溶解于10mL生理盐水中，浓度为20g/L。
1.2.2尾静脉注射虎红
选取健康成年的SD大鼠，15g/L戊巴比妥钠（15～20mL/kg）进行腹腔内麻醉。将大鼠尾巴拉直、绷紧，用热水浸泡、酒精擦拭等方法使血管扩张。采用4号半头皮针平行进针，进针从外1/3~1/2处开始，见到回血时，推入生理盐水，若无阻力，证明成功刺入大鼠尾静脉，此时换为20g/L虎红（40mL/kg）注射。
1.2.3光动力诱导视网膜静脉阻塞
大鼠单眼美多丽散瞳，另一眼为对照。固定于眼底激光仪前，以90D前置镜介导，用532nm激光光凝视盘周围所有主要的视网膜静脉，距视盘1PD（视盘直径）开始，长约4PD，减少血管再通的发生。激光参数：光斑直径50μm、能量75mW、曝光时间0.2s、击发点数150～200点。大鼠苏醒后回笼饲养。
1.2.4光凝情况的判断
血栓形成的指针为光凝时可见静脉内明显的黑色血栓形成，栓子间静脉无血液流动，静脉粗细不均。远端静脉迂曲、扩张,周边视网膜可见散在小点片状出血。部分血管光凝时会造成出血，并进入玻璃体腔。光凝术后2wk采用心内注射FITCdextran视网膜铺片的方法观察新生血管生成的情况。FITCdextran溶于无菌生理盐水中，浓度为50g/L，注入心室之前，离心（10000rpm， 3min），上清备用。将大鼠常规麻醉固定，剪开胸骨，打开胸腔，将1mL FITC dextran溶液（分子量：2×106，50g/L），注入左心室，观察小鼠的口、鼻、耳廓变黄为灌注成功。将大鼠眼球摘除，标记方向，40g/L多聚甲醛中固定1h[1]。然后在手术显微镜下，沿角膜缘剪开球壁，去除晶状体、玻璃体，用虹膜恢复器将视网膜感觉层与色素上皮层分离，去除巩膜、脉络膜和视网膜色素上皮层，将视网膜感觉层在PBS液中漂洗，清除残存玻璃体，最后将视网膜平铺在玻片上，穿刺刀以视乳头为中心放射状切开，甘油封片，荧光显微镜下观察并照像。
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