作者：王建明，宋艳萍，孙乃学，冯海晓，惠 娜，范雅稚，胡 凯
作者单位：1中国陕西省西安市，西安交通大学医学院第二附属医院眼科；2中国陕西省西安市中心医院血研所
【摘要】 目的：探讨重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin, rhEPO）对急性高眼压视网膜缺血所致的视神经和视网膜超微结构损害的保护作用。
方法：将12只健康新西兰白兔平均分为模型组和EPO组。两组兔均任选1眼作为实验眼，用生理盐水前房灌注法造成急性高眼压模型。造模前第3d及造模结束时，EPO组兔皮下注射rhEPO 100U/kg共两次。第7d进行视神经和视网膜的超微结构观察。
结果：急性高眼压使视神经和视网膜的超微结构受到明显损害，全身使用rhEPO后这种损害显著减轻。
结论：rhEPO能够减轻急性高眼压引起的视神经和视网膜超微结构损害。rhEPO可能成为新的视神经保护药物。
【关键词】 重组人促红细胞生成素；视网膜；视神经；超微结构；缺血再灌注损伤
Protection of systemic recombinant human erythropoietin on the ultrastructure of retina and optic nerve in an acute high intraocular pressure rabbit model
JianMing Wang1, YanPing Song2, NaiXue Sun1, HaiXiao Feng1, Na Hui1, YaZhi Fan1, Kai Hu2
Foundation items: Science and Technology Research Foundation of Shaanxi Province, China (No.2008K1407); Medical and Health Research Foundation of Xian, Shaanxi Province,China(No.SF080042)
1Department of Ophthalmology, the Second Hospital of Xian Jiaotong University, Xian 710004, Shaanxi Province, China;2Blood Institute, Xian Central Hospital, Xian 710003, Shaanxi Province, China
AbstractAIM: To investigate the protective effect of systemic recombinant human erythropoietin (rhEPO) on the ultrastructure of retina and optic nerve following acute high intraocular pressure (IOP).
METHODS: Twelve New Zealand white rabbits were divided equally into the model group and the EPO group. Either of bilateral eyes was randomly made into the acutely high intraocular pressure model using the method of saline perfusion into anterior chamber. rhEPO 100U/kg was injected into the hypodermic tissue of EPO group rabbits 3 days before and after perfusion, respectively. At 7 days after perfusion, the ultrastructure of retina and optic nerve was observed.
RESULTS: The ultrastructure of retina and optic nerve were significantly harmed after IOP was acutely raised a high level. Systemic rhEPO significantly reduced the ultrastructure injury.
CONCLUSION: rhEPO can protect the ultrastructure of retina and optic nerve. rhEPO may be a novel neuroprotective agent for optic nerve and retina.
KEYWORDS: recombinant human erythropoietin; retina; optic nerve; ultrastructure; ischemiareperfusion injury
Wang JM, Song YP, Sun NX, et al. Protection of systemic recombinant human erythropoietin on the ultrastructure of retina and optic nerve in an acute high intraocular pressure rabbit model. Int J
Ophthalmol(Guoji Yanke Zazhi)2008;8(11):22212223
0引言
促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）是一种刺激骨髓红系造血的糖蛋白造血因子，临床上已经应用于治疗贫血，取得了一定疗效。既往研究认为EPO作用特异且专一在造血细胞方面，然而现在的研究认为其可能不仅对缺氧造成的脑神经起到保护作用[1]，而且可能对缺氧造成的视网膜神经损害也起到保护作用[2,3]。青光眼、视网膜脱离、视网膜色素变性等疾病的共同病理机制是视网膜神经节细胞、光感受器细胞等神经元的凋亡，最终导致视力的丧失。因此，EPO的神经保护作用对治疗这些疾病有一定的实际意义。本研究通过观察视网膜和视神经超微结构的变化再次探讨重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin, rhEPO）对急性高眼压兔眼视网膜缺血时视网膜和视神经的保护作用。
1材料和方法
1.1材料 健康成年新西兰白兔12只，由西安交通大学实验动物中心提供，体质量2.0～2.5kg，雌雄不限。自由饮
图1兔视神经的超微结构（×15000） A:正常对照组视神经轴突内的神经纤维及线粒体; B:模型组视神经轴突内的神经纤维及线粒体消失,轴突成空壳样结构; C: EPO组视神经轴突内轻度肿胀的神经纤维及线粒体
图2家兔视网膜节细胞的超微结构(×20000) A:正常对照组视网膜节细胞核内染色质均匀,核膜完整,有丰富的粗面内质网和线粒体; B:模型组视网膜节细胞核内染色质边集,核膜肿胀,线粒体成空腔样,细胞结构空旷; C: EPO组视网膜节细胞质内细胞器较丰富,线粒体轻度肿胀食，分笼喂养。实验前裂隙灯显微镜及眼底镜检查眼部无异常。rhEPO（成都地奥制药有限公司产品），眼表面麻醉药benoxil（日本参天制药），普南扑灵滴眼液（日本千寿制药），H 600型透射电子显微镜（日本日立公司）。
1.2方法 将12只兔平均分为模型组和EPO组。两组兔均任选一眼作为实验眼（模型组兔对侧眼作为正常对照眼），用前房灌注的方法造成急性高眼压模型。造模前第3d及造模结束时EPO组兔分别皮下注射rhEPO 100U/kg共两次。第7d进行视神经和视网膜的超微结构观察。
1.2.1急性高眼压模型的建立 盐酸氯胺酮50mg/kg兔肌肉注射全麻，眼部滴用表面麻醉药benoxil局部表面麻醉。麻醉成功后将兔俯卧位于兔固定夹中。普南扑灵滴眼液5min内滴眼3次。将连接无菌生理盐水瓶的25G针头从颞侧角巩膜缘内刺入兔眼前房，缓慢升高输液瓶使得输液瓶内的液平面垂直高度高于兔眼150cm，此时在眼内形成14.6kPa（110mmHg）的眼压。直接眼底镜观察可见视网膜中央动脉塌陷、视网膜苍白。50min后将输液瓶高度逐渐放低，缓慢减低眼内压，直至输液瓶高度降至30cm（约21mmHg），10min后小心拔出灌注针头，直接眼底镜观察可见视网膜血流恢复。
1.2.2电镜标本的制作与观察 盐酸氯胺酮50mg/kg肌肉注射全麻，左心生理盐水冲洗和40g/L多聚甲醛灌注固定，待动物完全僵硬后立即摘取眼球（带尽量长的视神经），眼球和视神经分离后均浸入冷电镜固定液（100g/L多聚甲醛100mL，250g/L戊二醛50mL，0.2mol/L PB250mL，蒸馏水100mL，pH为7.4）48h。视神经以及视乳头边缘上或下方全层眼球壁的组织块用10g/L锇酸后固定、脱水，分别用丙酮包埋。将其制成50nm超薄切片（视神经为横断面切片），透射电镜观察拍照。
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